[发明专利]一种快速检测与GBS相关的易感基因Siglec14/5及其融合突变的方法

权利要求书

1.一种快速检测与GBS相关的易感基因Siglec14/5及其融合突变的方法，其特征在于：向同一管中添加三组引物及探针，连续进行PCR和qPCR两轮反应，其中，所述引物包括第一轮Siglec14/5融合突变基因的PCR扩增引物、第二轮靶向融合突变基因的qPCR检测引物和探针以及靶向野生型正常Siglec14与Siglec5基因之间非编码区序列的qPCR检测引物和探针；

其中，第一轮PCR引物Tm值高于第二轮qPCR引物Tm值，两轮PCR反应均分别经过高温变性和退火延伸的过程，且第一轮PCR的退火温度大于第二轮qPCR退火温度；

在第二轮qPCR中利用荧光信号的不同一次性对Siglec基因的野生型、突变型、杂合型进行有效区分。

2.根据权利要求1所述的快速检测与GBS相关的易感基因Siglec14/5及其融合突变的方法，其特征在于：Siglec-GAP-F-1、Siglec-GAP-R-1、Siglec-GAP-F-2或Siglec-GAP-R-2为正常Siglec基因之间非编码区序列的检测引物；Siglec-GAP-P-1或Siglec-GAP-P-2为正常Siglec基因之间非编码区序列的检测探针，仅在第二轮qPCR检测时进行反应；Siglec-L-F-1或Siglec-L-F-2靶向Siglec14基因启动子区域，为第一轮PCR上游扩增引物；Siglec-L-R-1或Siglec-L-R-2靶向Siglec5基因的下游编码区域，为第一轮PCR下游扩增引物；Siglec-S-F-1或Siglec-S-F-2为第二轮靶向融合突变基因的qPCR上游检测引物；Siglec-S-R-1、Siglec-S-R-2为第二轮靶向融合突变基因的qPCR下游检测引物；Siglec-S-P-1或Siglec-S-P-2为第二轮靶向融合突变基因的qPCR的检测探针。

3.根据权利要求2所述的快速检测与GBS相关的易感基因Siglec14/5及其融合突变的方法，其特征在于：探针可以是普通Taqman探针或相同序列的MGB探针，探针可以是FAM、VIC、CY5、ROX、SYTO-9通道中任意两种不同的标记。

4.根据权利要求1～3任一所述的快速检测与GBS相关的易感基因Siglec14/5及其融合突变的方法，其特征在于：PCR和qPCR两轮反应的步骤为：1)90～98℃预变性2～10min；2)启动第一轮PCR扩增反应，90～98℃变性5～30s；3)72～65℃退火并延伸60～200s，第一轮PCR反应共循环30～45次；4)启动第二轮qPCR检测反应，90～98℃5～30s；5)55～60℃退火并延伸30～60s，第二轮qPCR反应共循环30～45次，退火延伸过程收集信号。

5.根据权利要求4所述的快速检测与GBS相关的易感基因Siglec14/5及其融合突变的方法，其特征在于：PCR和qPCR两轮反应的步骤为：1)94℃预变性2min；2)启动第一轮PCR扩增反应，94℃变性5s；3)72℃退火并延伸120s，第一轮PCR反应共循环30次；4)启动第二轮qPCR检测反应，94℃变性5s；5)60℃退火并延伸30s，第二轮qPCR反应共循环45次，退火延伸过程收集信号。

6.根据权利要求4所述的快速检测与GBS相关的易感基因Siglec14/5及其融合突变的方法，其特征在于：PCR和qPCR两轮反应的步骤为：1)94℃下预变性2min；2)启动第一轮PCR扩增反应，98℃变性5s；3)72℃退火并延伸120s，第一轮PCR反应共循环30次；4)启动第二轮qPCR检测反应，98℃变性5s；5)60℃退火并延伸30s，第二轮qPCR反应共循环45次，退火延伸过程收集信号。

7.根据权利要求1所述的快速检测与GBS相关的易感基因Siglec14/5及其融合突变的方法，其特征在于：检测样本可采用阴道分泌物，血液，羊水，尿液，粪便。