[发明专利]制备纯毛发及指趾甲型外胚叶发育不良模型猪核移植供体细胞的方法及其专用基因编辑系统在审
| 申请号： | 202211039187.7 | 申请日： | 2022-08-29 |
| 公开（公告）号： | CN115927193A | 公开（公告）日： | 2023-04-07 |
| 发明（设计）人： | 牛冬;汪滔;马翔;王磊;程锐;赵泽英;方园;胡世芳 | 申请（专利权）人： | 南京启真基因工程有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/113;C12N9/22;C12N15/70;C12N15/87;C12N15/85;C12N15/89;A01K67/027;A61K49/00 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人： | 关畅 |
| 地址： | 211306 江苏省南京市高淳区经*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 制备 毛发 趾甲 型外胚叶 发育 不良 模型 移植 供体 细胞 方法 及其 专用 基因 编辑 系统 | ||
1.一种制备重组猪细胞的方法，包括如下步骤：将HOXC13-gRNA1、HOXC13-gRNA4和NCN蛋白共转染猪细胞，得到重组猪细胞；
所述HOXC13-gRNA1为sgRNA，其靶序列结合区如SEQ ID NO：16中第3-22位核苷酸所示；所述HOXC13-gRNA4为sgRNA，其靶序列结合区如SEQ ID NO：17中第3-22位核苷酸所示；所述NCN蛋白为Cas9蛋白或具有Cas9蛋白的融合蛋白。
2.HOXC13-gRNA1、HOXC13-gRNA4和NCN蛋白在制备试剂盒中的应用；
HOXC13-gRNA1为权利要求1中所述的HOXC13-gRNA1；HOXC13-gRNA4为权利要求1中所述的HOXC13-gRNA4；NCN蛋白为权利要求1中所述的NCN蛋白；
所述试剂盒的用途为如下(a)或(b)或(c)：(a)制备重组猪细胞；(b)制备纯毛发及指趾甲型外胚叶发育不良症模型猪；(c)制备纯毛发及指趾甲型外胚叶发育不良症细胞模型或纯毛发及指趾甲型外胚叶发育不良症组织模型或纯毛发及指趾甲型外胚叶发育不良症器官模型。
3.HOXC13-gRNA1、HOXC13-gRNA4和PRONCN蛋白在制备试剂盒中的应用；
HOXC13-gRNA1为权利要求1中所述的HOXC13-gRNA1；HOXC13-gRNA4为权利要求1中所述的HOXC13-gRNA4；所述PRONCN蛋白自上游至下游依次包括如下元件：信号肽、分子伴侣蛋白、蛋白标签、蛋白酶酶切位点、核定位信号、Cas9蛋白、核定位信号；
所述试剂盒的用途为如下(a)或(b)或(c)：(a)制备重组猪细胞；(b)制备纯毛发及指趾甲型外胚叶发育不良症模型猪；(c)制备纯毛发及指趾甲型外胚叶发育不良症细胞模型或纯毛发及指趾甲型外胚叶发育不良症组织模型或纯毛发及指趾甲型外胚叶发育不良症器官模型。
4.HOXC13-gRNA1、HOXC13-gRNA4和特异质粒在制备试剂盒中的应用；
HOXC13-gRNA1为权利要求1中所述的HOXC13-gRNA1；HOXC13-gRNA4为权利要求1中所述的HOXC13-gRNA4；所述特异质粒自上游至下游依次包括如下元件：启动子、操纵子、核糖体结合位点、PRONCN蛋白的编码基因、终止子；所述PRONCN蛋白自上游至下游依次包括如下元件：信号肽、分子伴侣蛋白、蛋白标签、蛋白酶酶切位点、核定位信号、Cas9蛋白、核定位信号；
所述试剂盒的用途为如下(a)或(b)或(c)：(a)制备重组猪细胞；(b)制备纯毛发及指趾甲型外胚叶发育不良症模型猪；(c)制备纯毛发及指趾甲型外胚叶发育不良症细胞模型或纯毛发及指趾甲型外胚叶发育不良症组织模型或纯毛发及指趾甲型外胚叶发育不良症器官模型。
5.一种试剂盒，包括HOXC13-gRNA1、HOXC13-gRNA4和NCN蛋白；
HOXC13-gRNA1为权利要求1中所述的HOXC13-gRNA1；HOXC13-gRNA4为权利要求1中所述的HOXC13-gRNA4；NCN蛋白为权利要求1中所述的NCN蛋白；
所述试剂盒的用途为如下(a)或(b)或(c)：(a)制备重组猪细胞；(b)制备纯毛发及指趾甲型外胚叶发育不良症模型猪；(c)制备纯毛发及指趾甲型外胚叶发育不良症细胞模型或纯毛发及指趾甲型外胚叶发育不良症组织模型或纯毛发及指趾甲型外胚叶发育不良症器官模型。
6.一种试剂盒，包括HOXC13-gRNA1、HOXC13-gRNA4和PRONCN蛋白；
HOXC13-gRNA1为权利要求1中所述的HOXC13-gRNA1；HOXC13-gRNA4为权利要求1中所述的HOXC13-gRNA4；PRONCN蛋白为权利要求3中所述的PRONCN蛋白；
所述试剂盒的用途为如下(a)或(b)或(c)：(a)制备重组猪细胞；(b)制备纯毛发及指趾甲型外胚叶发育不良症模型猪；(c)制备纯毛发及指趾甲型外胚叶发育不良症细胞模型或纯毛发及指趾甲型外胚叶发育不良症组织模型或纯毛发及指趾甲型外胚叶发育不良症器官模型。
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