[发明专利]一种选择性幽门螺旋杆菌培养基及其制备方法

说明书

本发明公开了一种选择性培养幽门螺旋杆菌培养基，涉及微生物培养技术。以水溶性壳聚糖作为主要碳源，添加抑菌剂在不影响幽门螺旋杆菌的基础上，抑制大多数真菌、革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的生长；以丙酮酸钠作为辅助提高幽门螺旋杆菌的生长和耐气性，中和氧气的毒性作用和抗生素的抑制作用，从而增强幽门螺旋杆菌的分离，同时提供一部分碳源；无菌冻融脱纤维羊血提供丰富的营养物质供幽门螺旋杆菌的生长，实现了促使幽门螺旋杆菌快速繁殖的同时，又能够避免杂菌感染。本发明具有高度选择性、生长率高等优点，可应用于临床、环境中对幽门螺旋杆菌的检测。

技术领域

本发明涉及微生物培养技术领域，具体涉及一种选择性幽门螺旋杆菌培养基及其制备方法。

背景技术

幽门螺旋杆菌是一种螺旋形、微厌氧、对生长条件要求十分苛刻的革兰氏阴性杆菌，2017年10月27日公布的致癌清单中再次被列为I类致癌物。

对幽门螺旋杆菌的诊断检测是目前本领域十分重要的研究方向，但是幽门螺旋杆菌在体外培养时，对环境要求非常苛刻，除了对气体环境有严苛的要求外，对于培养基的要求也相当严格，培养基不仅要满足幽门螺旋杆菌的营养需求，还要提供局部的微需氧条件以及合适的pH耐受范围，因而在实际工作中，培养基的质量优劣对检测结果的可靠程度有着直接的影响。

目前传统的分离培养基并不能适应幽门螺旋杆菌的分离培养要求，常用的培养基如哥伦比亚琼脂培养基、脑心浸液琼脂培养基在培养幽门螺旋杆菌上均没有优势，无法有效避免杂菌感染，且阳性检出率极低。

大多数的幽门螺旋杆菌的培养基依靠可溶性淀粉吸收毒性离子和细菌代谢产物，虽有一定的效果，但是本发明人在使用可溶性淀粉时发现，随着菌种的进一步生长，可溶性淀粉为杂菌的生长提供了良好庇护，不利于幽门螺旋杆菌的选择性培养。

因此，如何有效提高幽门螺旋杆菌的生长率，抑制其他干扰菌株的生长，制备一种选择性高、生长率好的培养基是需要解决的问题。

发明内容

本发明提供了一种选择性幽门螺旋杆菌培养基，以水溶性壳聚糖作为主要碳源，添加抑菌剂在不影响幽门螺旋杆菌的基础上，抑制大多数真菌、革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的生长；以丙酮酸钠作为辅助提高幽门螺旋杆菌的生长和耐气性，中和氧气的毒性作用和抗生素的抑制作用，从而增强幽门螺旋杆菌的分离，同时提供一部分碳源；无菌冻融脱纤维羊血提供丰富的营养物质供幽门螺旋杆菌的生长，实现了促使幽门螺旋杆菌快速繁殖的同时，又能够避免杂菌感染。

为解决上述技术问题，本发明提供技术方案如下：

一种选择性幽门螺旋杆菌培养基，包括如下含量的成分：

进一步的，一种选择性幽门螺旋杆菌培养基，包括如下含量的成分：

进一步的，所述络合壳聚糖包括壳聚糖、Ca²⁺；

具体的，所述水溶性壳聚糖的制备方法为：壳聚糖于乙酸溶液中溶解， 50～60℃下加入20％～25％(体积)H₂O₂解聚30～60min，再加入70％(体积)乙醇，静置沉淀，离心去上清，烘干，得到沉淀，将沉淀溶于水，加入饱和氯化钙络合，搅拌，得到水溶性壳聚糖；

进一步的，所述水溶性壳聚糖的制备方法为：壳聚糖于乙酸溶液中溶解，50～60℃下加入20％～25％(体积)H₂O₂解聚至壳聚糖粘度≤100Pa·s，再加入70％(体积)乙醇，静置沉淀，离心去上清，烘干，得到沉淀，将沉淀溶于水，20～30℃下加入饱和氯化钙络合，搅拌15min，得到水溶性壳聚糖。

进一步的，所述抑菌剂包括但不限于万古霉素、头孢磺啶、两性霉素 B、甲氧苄啶和硫酸多粘菌素B中的至少一种。