[发明专利]预测复发性流产人群孕期胎盘功能异常的标志物和方法

说明书

本发明公开了一种预测复发性流产人群孕期胎盘功能异常的标志物和方法，将血浆中PLGF水平作为预测复发性流产人群孕期胎盘功能异常的敏感生物标志物；首先应用差速离心法对URSA患者血浆中的血小板进行分离，然后使用DNA限制性内切酶对血小板沉淀进行核基因组DNA干扰的处理消化，然后直接对消化产物进行重亚硫酸盐处理，并结合焦磷酸测序法检测血小板mtDNA呼吸链相关基因位点的甲基化水平；本发明的优点在于：通过选择与URSA相关的线粒体位点进行甲基化水平检测，利用AUC评估生物标志物的诊断效能，提高对胎盘功能异常发病风险的预测能力。

技术领域

本发明涉及一种生物标志物，具体地说是一种预测复发性流产人群孕期胎盘功能异常的标志物和方法，属于生物标志物领域。

背景技术

自然流产占全部妊娠的发生率的15%-40%，连续2次或2次以上的自然流产称为复发性自然流产（RSA）, 引起RSA的因素复杂多样，主要包括遗传因素、感染因素、内分泌因素、解剖因素、免疫因素及凝血因素等。其中有40%-50%的患者流产原因未明，称为不明原因复发性流产（URSA）。

许多研究表明，孕期胎盘功能异常也是导致URSA的重要因素之一。胎盘是连接孕妇和胎儿的重要通道，是母体与胎儿之间进行气体交换、营养物质吸收以及排泄代谢产物的主要场所。胎盘生长因子（PLGF）是由胎盘分泌的重要血管生成因子之一，具有帮助胎盘维持正常血液供给、诱导胎儿血管内皮细胞增殖，以及促进血管生成的作用。当胎盘功能发生异常，PLGF水平低于正常生理范围时，容易引发妊娠高血压、子痫前期、胎儿生长受限、早产和流产等严重妊娠并发症。故血浆中的PLGF水平可能是由孕期胎盘功能异常引起的RSA的敏感生物标志物及未来干预治疗的新靶点和目标。近年来，在孕期胎盘功能异常因素的影响下， RSA的概率逐年上升， RSA概率的增高对女性妊娠有不利影响。因此，需要尽早采取有效方式进行诊断以明确引起RSA的胎盘功能异常因素，进而实施有效干预，提高妊娠率，改善妊娠结局，避免RSA的发生，已经成为当今社会的急切需求。

胎盘功能异常因素导致的URSA多在临床中难以明确其具体发病机制，通常是多个基因之间或多个基因与环境因素之间长期相互作用的结果。线粒体在维持细胞内能量稳态中发挥重要作用，并参与氧化磷酸化、活性氧ROS调节、钙离子动态平衡以及信号转导等多种重要生物过程。妊娠期病理状态下常伴有氧化应激反应增加，作为细胞内活性氧产生的主要场所，线粒体也是氧化应激损伤的靶点。当孕期胎盘功能异常时，孕妇胎盘发生氧化应激，使其线粒体更易受损。

因此，分析血小板线粒体DNA（mtDNA）关键位点的甲基化水平与URSA人群中胎盘功能异常的关联，明确对胎盘功能异常发生风险有预测作用的血小板mtDNA中的敏感CpG位点，并以此作为潜在生物标志物，将有助于孕期胎盘功能异常事件的发病风险预测、诊断和个体化治疗。但是到目前为止，还未发现有相关的人群研究和探索，并缺乏相应的人群研究数据。因此亟需确定URSA人群中胎盘功能异常的CpG位点和甲基化水平。

早期识别孕期胎盘功能异常高危人群，并采取针对性的治疗措施，是减少URSA发生，获得健康妊娠结局的关键。危险预测可为疾病预防、政府决策和卫生干预方案效果评价，以及临床治疗提供可参考的信息。ROC曲线下面积（AUC）是评估预测效果准确性的综合评价指标之一，具有较为准确的预测效能。使用AUC对线粒体位点的甲基化水平进行预测，以判断血小板mtDNA中的相关位点的甲基化水平是否可以作为预测孕期胎盘功能异常的标志物。将表观遗传学技术与流行病学方法相结合，评估个体患病风险，并据此采取更早或更强的干预措施，使患者从中受益。可以有效提高疾病风险预测的能力。

发明内容

本发明的目的在于，设计了一种预测复发性流产人群孕期胎盘功能异常的标志物和方法，利用AUC评估生物标志物的诊断效能，提高对胎盘功能异常发病风险的预测能力。

本发明的技术方案为：

一种预测复发性流产人群孕期胎盘功能异常的标志物，所述生物标志物是将血浆中PLGF水平作为预测复发性流产人群孕期胎盘功能异常的敏感生物标志物。