[发明专利]一种基于CRISPR技术检测甘薯羽状斑驳病毒的方法

权利要求书

1.一种用于检测甘薯羽状斑驳病毒的gRNA，所述gRNA包括与V型Cas蛋白结合的区域和与靶核酸杂交的导向序列，所述靶核酸为来源于甘薯羽状斑驳病毒的核酸；其特征在于，所述与靶核酸杂交的导向序列选自下组任意一种或其组合：

(1)所述与靶核酸杂交的导向序列含有20-30个碱基，并且与SEQ ID No.1所示的序列或其反向互补序列杂交，并且所述导向序列包含SEQ ID No.3-11任一所示的序列；

(2)所述与靶核酸杂交的导向序列包含SEQ ID No.3-11任一所示的序列，并且在SEQID No.3-11任一所示的序列的3’端还包括1-10个碱基，并且，所述与靶核酸杂交的导向序列与SEQ ID No.1所示的序列或其反向互补序列杂交；

(3)所述与靶核酸杂交的导向序列与SEQ ID No.3-11任一所示的序列相比，在SEQ IDNo.3-11任一所示的序列的3’端连续缺失1-5个碱基；

(4)所述与靶核酸杂交的导向序列如SEQ ID No.3-11任一所示。

2.一种检测/诊断甘薯羽状斑驳病毒或甘薯病毒病的方法，所述方法包括将待测核酸与V型Cas蛋白、权利要求1所述的gRNA和单链核酸检测器接触；检测由Cas蛋白切割单链核酸检测器产生的可检测信号，从而检测/诊断甘薯羽状斑驳病毒或甘薯病毒病。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述V型Cas蛋白选自以下I-II任意一种：

I、所述V型Cas蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示；

II、所述V型Cas蛋白的氨基酸序列与SEQ ID No.2相比，在对应于SEQ ID No.2所示的氨基酸序列的第267位氨基酸存在突变。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述方法还包括从待测样品中获得待测核酸的步骤。

5.根据权利要求2-4任一所述的方法，其特征在于，所述方法还包括采用引物对进行扩增获得待测核酸的步骤。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述引物对的上游引物如SEQ ID No.13或14所示，所述引物对的下游引物如SEQ ID No.15或16所示。

7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述样品为来自植物或植物的传毒介质的样品。

8.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述可检测信号可通过以下任一方式实现：基于视觉的检测，基于传感器的检测，颜色检测，基于金纳米颗粒的检测，荧光偏振，荧光信号，胶体相变，电化学检测或基于半导体的检测。

9.一种用于检测或诊断待测植物是否感染甘薯羽状斑驳病毒的系统、组合物或试剂盒，所述系统、组合物或试剂盒包括V型Cas蛋白、权利要求1所述的gRNA和单链核酸检测器。

10.一种检测/诊断甘薯羽状斑驳病毒或者甘薯病毒病的系统、组合物或试剂盒，所述系统、组合物或试剂盒包括权利要求1所述的gRNA，所述系统、组合物或试剂盒还包括V型Cas蛋白以及单链核酸检测器。

11.根据权利要求9-10任一所述的系统、组合物或试剂盒，其特征在于，所述系统、组合物或试剂盒包括权利要求6中的引物对。

12.权利要求9-11任一所述的组合物在诊断或检测甘薯病毒病中的用途，或者在用于制备诊断或检测甘薯病毒病的试剂或试剂盒中的用途。

13.权利要求9-11任一所述的组合物在检测或诊断甘薯羽状斑驳病毒中的用途，或者在制备检测或诊断甘薯羽状斑驳病毒的试剂或试剂盒中的用途。