[发明专利]一株宽裂解谱金黄色葡萄球菌噬菌体SapYZUbeta及其应用

说明书

本发明公开了一株宽裂解谱金黄色葡萄球菌噬菌体SapYZUbeta及其应用，该噬菌体已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏时间为2022年5月16日，保藏编号为CCTCC NO：M 2022629，经鉴定该噬菌体基因全长为17,790bp，不含有与溶原性、毒力和抗生素抗性的tRNA或基因，从遗传背景上证实了该噬菌体应用于食品中病原菌及噬菌体治疗的安全性。另外，噬菌体的效价高达1.9×10supgt;9/supgt;PFU/mL，在pH 3‑12和温度‑80‑60℃范围内活性稳定，可应用于各种基质中。本发明提供的噬菌体可以裂解在不同地区分离的多耐药野生株，包括MRSA、MSSA，具有裂解谱广、裂解效率高的特点。

技术领域

本发明属于生物工程领域，具体涉及一株宽裂解谱金黄色葡萄球菌噬菌体SapYZUbeta及其应用。

背景技术

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus，SA)是一种高致病性细菌，在人类和家畜中可引起从轻微的皮肤感染到危及生命的疾病，如肺炎、中毒性休克综合征和败血症，严重威胁食品工业及人类的卫生安全。它对外界环境抵抗力较强且营养需求低，因此可广泛存在于自然界中，在空气、土壤、水及食具上均有分布。MDR和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant S.aureus，MRSA)因其表型可塑性和适应性，在临床和牲畜相关的环境和食物链中经常被检测到，尤其是牛奶样品，其营养分布十分均衡并具有流动性，经金黄色葡萄球菌污染后传播速度较快且不易控制。然而，摄入被金黄色葡萄球菌污染的食物后会导致食物中毒，例如腹泻和呕吐，严重时可能导致上呼吸道感染、化脓性感染甚至死亡。一般采取抗生素疗法对金黄色葡萄球菌进行防治，这种方法在短期内具有一定的效果。同时，抗生素价格低廉，操作简单，因此人们过度依赖并大量使用，从而导致细菌的耐药性增加，其中最为典型的就是具有“超级细菌”之称的MRSA，每年由该菌引发的感染都会给人类带来巨大的损失。另外，物理方法对金黄色葡萄球菌的控制在近些年也得到了很大的发展和应用，例如辐照、巴氏杀菌和食品加工中的高静水压力等，但其中的一些方法在杀菌过程中会导致食品的营养和感官品质发生不良变化。此外，化学对抗细菌污染的方法也得到了很大的关注，但仍存在风险，如氯等化学消毒剂不环保，对公众健康有害，在某些条件下甚至会形成致癌化合物。因此，现在迫切开发新型生物抑菌剂来降低金黄色葡萄球菌的污染。

噬菌体(Bacteriophages或phages)是一种通过与细菌细胞表面特异位点结合后杀灭特异性细菌的病毒，在地球上广泛存在。通常情况下，噬菌体在宿主细菌存在的情况下呈现指数形式复制，并消除目标细菌达到治疗的效果。迄今为止，有关噬菌体在各种基质中治疗不同细菌感染性疾病的研究性文章层出不穷，总体研究结果证明了它的安全性和有效性。例如，2020年的一项人体研究中，作为辅助治疗制剂的3种噬菌体AB-SA01在接受90天的生化检测后，未报告出任何不良反应。作为一种治疗药物，与抗生素相比，噬菌体具有几个优势：可保护宿主细菌的靶向特异性、在感染部位快速增殖的能力、对人体无害、不产生抗性、生产成本低。然而，在应用或治疗时需要高效噬菌体，即根据其生物学特性、热稳定性和pH稳定性以及裂解活性(体外、体内动物实验和食品应用)来筛选的。虽然噬菌体在金黄色葡萄球菌的治疗中广泛存在并研究，但寻找金黄色葡萄球菌噬菌体候选人更具挑战性。因此，分离宿主范围广、裂解能力强的新型特异性噬菌体仍然是必要的。