[发明专利]一种重组SOD蛋白及其培育方法

说明书

本发明涉及一种SOD，具体说是重组SOD蛋白及其培育方法。它是从人体内选原料后依次通过密码子优得到重组制得的。其培育方法是将重组制得的SOD蛋白转变成基因序列构建到载体中，经过培育获得大量高质量的重组SOD蛋白。获得大量的该SOD的代价低，且该SOD没有排他性，易常温保存，可避免艾滋病等血液病毒的交叉感染及其它潜在的危险。

技术领域

本发明涉及一种SOD，具体说是重组SOD蛋白及其培育方法。

背景技术

生物体的衰老过程是机体的组织细胞不断产生的自由基积累结果，自由基可以引起DNA损伤从而导致突变，诱发肿瘤形成。自由基是人体正常代谢的中间产物，其反应能力很强，可使细胞中的多种物质发生氧化，损害生物膜。还能够使蛋白质、核酸等大分子交联，影响其正常功能。超氧化物歧化酶(SOD)是1938年首次从牛红血球中分离得到超氧化物歧化酶，人们对SOD的研究己有七十多年的历史。SOD在消除过量的活性氧和维持免疫系统的氧化还原平衡方面发挥着重要作用。

目前，90％的SOD都是从动物血液内提取的，代价昂贵。同时，动物性SOD具有排他性、不易常温保存。而且，大部分SOD均从动物血液内提取，需要的动物血液较多，即需要的动物数量较多，没法保证每一个动物均是健康的，存在艾滋病等血液病毒的交叉感染及其它潜在危险。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提高一种重组SOD蛋白及其培育方法，获得大量的重组SOD蛋白的代价低，且重组SOD蛋白没有排他性，易常温保存，可避免艾滋病等血液病毒的交叉感染及其它潜在的危险。解决了现有技术中动物SOD的代价昂贵，具有排他性、不易常温保存，存在艾滋病等血液病毒的交叉感染及其它潜在危险的技术问题。

为解决上述问题，提供以下技术方案：

本发明的重组SOD蛋白是具有序列表中序列2蛋白序列的蛋白质。

上述重组SOD蛋白的制备方法的特点是包括如下步骤：

第一步，构建蛋白的新突变体

首先，选取人体内如序列表中序列2蛋白序列的蛋白质，对第135点位和第148点位进行密码子优化获得的序列表中序列2蛋白序列的蛋白质；

接着，将密码子优化后的蛋白质转变成序列表中序列4基因序列的DNA；

然后，对上一步转变的DNA进行测序，选出突变成功的DNA群体；

之后，将突变成功的DNA构建到载体中即可；

第二步，对构建成功的菌落进行扩增、纯化即可得到高质量重组SOD蛋白。

其中，扩增、纯化的步骤如下：

首先，挑取阳性菌落接入LB培养基中；

然后，在LB培养基加入80-120μL的卡那霉素，得到混合液；

接着，利用摇床对混合液进行一次培养，摇床转速为200-240rpm/min，摇床内温度为36-37.5℃，培养时间为12小时以上；

然后，将一次培养后的混合液分装到多个大瓶中，再利用摇床对所有大瓶的混合液进行二次培养，摇床转速为200-240rpm/min，摇床内温度为36-37.5℃，培养时间为24小时以上；

最后，在二次培养后的混合液中加入裂解液、再纯化即可到的高质量SOD。

所述载体为pET28a载体。

分装的规则是按照体积比1:30的比例。

序列表中序列2蛋白序列的蛋白质为人体中的超氧化物歧化酶I，即hSOD1。

采取以上方案，具有以下优点：