[发明专利]禽戊型肝炎病毒ORF3亚单位疫苗及其制备方法

说明书

本发明公开了一种禽戊型肝炎病毒ORF3亚单位疫苗及其制备方法，属于基因工程技术领域。本发明的禽戊型肝炎病毒ORF3亚单位疫苗，由抗原组合物和疫苗佐剂组成；所述抗原组合物由VaHEV ORF3重组蛋白和YT‑aHEV ORF3重组蛋白组成；所述VaHEVORF3重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述YT‑aHEV ORF3重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明的禽戊型肝炎病毒ORF3亚单位疫苗具有很好的免疫效果，可减轻aHEV对鸡生产性能造成的不利影响。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，具体涉及一种禽戊型肝炎病毒ORF3亚单位疫苗及其制备方法。

背景技术

禽戊型肝炎病毒(avian hepatitis E virus，aHEV)被认为是鸡大肝大脾病(Bigliver and spleen，BLS)和肝破裂出血综合征(Hepatic Rupture and HemorrhageSyndrome，HRHS)的主要病原。禽HEV对各国养禽业造成了严重的经济损失，早在2010年，zhao等人发现中国禽HEV分离株基因组序列与欧洲禽HEV同源性高达98.3％(Zhao et al.,2010)，近几年的流行病学调查结果表明，aHEV在中国的检出率正在不断增加(Su et al.,2018；Su et al.,2020；Zhao et al.,2017；Zhang et al.,2022；Liu et al.,2018；Li etal.,2020)。迄今为止，全球还没有针对aHEV的商品化疫苗可供使用。

目前还缺乏高效的体外培养体系可以用于aHEV的大规模培养，这给传统灭活疫苗和弱毒活疫苗的研究带来很大困难，为此多数研究聚焦于aHEV基因工程亚单位疫苗。禽HEV基因组包括三个开放阅读框(open reading frame,ORF)，分别为ORF1、ORF2和ORF3(Kabrane-Lazizi et al.,1999)。ORF2与病毒感染入侵宿主细胞有着密切的联系，在衣壳蛋白组装的过程中发挥作用，现有技术中对于aHEV基因工程亚单位疫苗的研究也多集中于ORF2。

ORF3编码最小的磷酸化蛋白。近年来研究发现，ORF3含有能够刺激动物机体产生强烈免疫反应的抗原表位，且能够影响病毒颗粒的装配释放、免疫抑制以及细胞的信号传导等方面(蒋奉霖，2014)，被认为是研制aHEV亚单位疫苗潜在的候选靶蛋白之一。Zhao等人通过对中国分离株CaHEV-ORF3抗原表位鉴定发现，CaHEV-ORF3上存在3个抗原结构域，分别为(aa)1-28、55-74和75-88三处，其中aa 75-88为主要抗原结构域，通过特异性单抗鉴定发现，该结构与至少存在2个抗原表位，且该结构域为明显的优势结构域(Zhao etal,2002)。

因此，通过对ORF3的深入研究，能够为抗戊型肝炎病毒疫苗的设计开辟新的途径。

发明内容

针对上述现有技术，本发明的目的是提供一种禽戊型肝炎病毒ORF3亚单位疫苗及其制备方法。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明的第一方面，提供一种禽戊型肝炎病毒ORF3亚单位疫苗，由抗原组合物和疫苗佐剂组成；

所述抗原组合物由VaHEV ORF3重组蛋白和YT-aHEV ORF3重组蛋白组成；

所述VaHEV ORF3重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述YT-aHEV ORF3重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

优选的，所述VaHEV ORF3重组蛋白和YT-aHEV ORF3重组蛋白的重量比为1:1。

优选的，所述抗原组合物和疫苗佐剂的重量比为1:1。

优选的，所述疫苗佐剂为弗氏完全佐剂或弗氏不完全佐剂。