[发明专利]一种预示和鉴定大骨鸡股骨长性状的分子标记方法

说明书

一种预示和鉴定大骨鸡股骨长性状的分子标记方法，属于动物分子遗传学技术领域。为了更准确方便地鉴定大骨鸡股骨长性状，本发明根据鸡PCSK1基因SNP位点c.809CA上下游序列设计引物，再根据所得引物进行鸡基因组DNA的PCR扩增，之后利用限制性内切酶对扩增产物进行酶切，再对酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳分离，获得大骨鸡股骨长性状标记基因型。本发明操作简单、费用低、精确度高，是一种有效的分子标记育种手段，为大骨鸡的标记辅助选择提供了科学依据，采用该方法可以加快大骨鸡的育种进程，培育适合市场需求的大骨鸡，以提升大骨鸡的经济性能。

技术领域

本发明属于动物分子遗传学领域，特别是涉及一种用分子标记辅助选择大骨鸡股骨长性状的方法。

背景技术

蛋肉兼用型地方品种鸡由于其本身经济价值的特点，在中国等发展中国家具有良好的发展前景。然而自20世纪70年代以来，由于大量引进国外鸡种，中国本土地方品种鸡的饲养及销售都受到极大的冲击，对地方品种鸡的经济性状的改良已迫在眉睫。因此，从分子水平上探究地方品种鸡的生长性状的调控机制，基于分子遗传育种手段对地方鸡进行品种改良，对于优化我国家禽产业结构，保证我国畜牧业持续高效发展具有重大的战略意义和现实意义。

大骨鸡又称庄河大骨鸡、庄河鸡，原产于辽宁省庄河市，主要分布在东北、河北及内蒙古的部分地区，具有体躯高大、蛋大壳红、耐粗饲、耐寒、抗病力强等优点，被誉为东北鸡王。大骨鸡是我国地方鸡品种中被列入鸡标准品种的2个品种之一，2000年被列入国家重点保护地方畜禽品种资源名录，是我国具有极高价值的家禽育种素材之一。

前体蛋白转化酶(proprotein convertases，PCs)是一类具有钙离子依赖性的丝氨酸蛋白酶，主要参与细胞分泌途径中多种蛋白前体的加工过程。由于其催化结构域与枯草杆菌蛋白酶和酵母kexin蛋白相似，因此其相应的编码基因则命名为PCSKs。PCSK1基因的编码产物PC1/3隶属于这一蛋白酶家族。研究结果表明，PC1/3蛋白主要参与细胞调节型分泌途径中分泌囊泡内的激素和神经肽前体的加工成熟过程，包括生长激素释放激素等，因此PC1/3蛋白可以通过参与动物机体生长激素的加工与释放过程进而影响动物体的生长发育过程。相关研究结果表明，PCSK1基因敲除小鼠会表现出生长迟缓，处理组小鼠体重与对照组小鼠相比减少约40％。目前为止，尚未发现有关PCSK1基因分子标记对大骨鸡股骨长性状进行选择的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种预示和鉴定大骨鸡股骨长性状的分子标记方法，其特征在于，根据鸡PCSK1基因突变位点c.809CA上下游250bp序列设计引物，再根据所得引物进行鸡基因组DNA的PCR扩增，之后利用限制性内切酶对扩增产物进行酶切，再对酶切产物进行电泳分离，最后获得鸡腹脂标记基因型；

所述引物的核苷酸序列为：

PCSK1-F1:5’-ATTATCTAAATGAATAGCAAAAGGC-3’

PCSK1-R1:5’-ATTAAAATCTCTGTTCTCCTTTTCA-3’。

所述方法的步骤如下：

1)根据鸡PCSK1基因SNP位点c.809CA上下游序列设计引物，获得扩增引物；

2)利用步骤1)所得的扩增引物进行鸡基因组DNA的PCR扩增，获得扩增产物；

3)利用限制性内切酶对步骤2)所得的扩增产物进行酶切，获得酶切产物；

4)利用琼脂糖凝胶对步骤3)所得的酶切产物进行电泳分离，获得标记基因型；

步骤1)所述引物为

PCSK1-F1:5’-ATTATCTAAATGAATAGCAAAAGGC-3’

PCSK1-R1:5’-ATTAAAATCTCTGTTCTCCTTTTCA-3’；