[发明专利]一种基于动态高压微射流结合高效液相色谱技术分析活性乳清蛋白含量的方法在审
| 申请号: | 202210970308.3 | 申请日: | 2022-08-12 |
| 公开(公告)号: | CN115480002A | 公开(公告)日: | 2022-12-16 |
| 发明(设计)人: | 俞兰秀;黄彩娟;杨郁荭 | 申请(专利权)人: | 卡士乳业(深圳)有限公司 |
| 主分类号: | G01N30/02 | 分类号: | G01N30/02;G01N30/06 |
| 代理公司: | 广州粤高专利商标代理有限公司 44102 | 代理人: | 林宇然 |
| 地址: | 518105 广东省深圳市*** | 国省代码: | 广东;44 |
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| 摘要: | |||
| 搜索关键词: | 一种 基于 动态 高压 射流 结合 高效 色谱 技术 分析 活性 蛋白 含量 方法 | ||
1.一种基于动态高压微射流结合高效液相色谱技术分析活性乳清蛋白含量的方法,其特征在于,该方法包括以下步骤:(1)准确称取乳样品100.00克,在4℃条件下经5000g离心20min,或7000g离心20min,或9000g离心20min,或11000g离心20min脱脂;(2)由步骤(1)得到的样品取中间清液,用去离子水稀释2倍,或4倍,或6倍;(3)将由步骤(2)得到的样品进行动态高压微射流处理:进行20MPa处理一次,或20MPa处理两次,或20MPa处理三次,或40MPa处理一次,或40MPa处理两次,或40MPa处理三次,或60MPa处理一次,或60MPa处理两次,或60MPa处理三次;(4)过0.22μm水系滤膜,进行高效液相色谱分析,色谱柱为gel 2000SWXL,规格为300mm×7.8nm,或C18柱,规格为4.6mm×250mm,所述的流动相为0.1mol/LNaNO3溶液和0.1mol/L Na3PO4-Na2SO4缓冲液,或0.2mol/L Na3PO4缓冲液,或0.1%三氟乙酸溶液和0.1%三氟乙酸乙腈溶液,其中,NaNO3的pH为7.0,Na3PO4-Na2SO4的pH为6.7,Na3PO4的pH为7.0;柱温为35℃或25℃,进样量为10μL,高效液相色谱检测器为紫外检测器,检测波长为214nm,或220nm,或230nm,或254nm,或280nm;(5)根据标准曲线获得样品中α-乳白蛋白、β-乳球蛋白和乳铁蛋白的含量。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述的最佳离心脱脂条件为:样品经7000g离心20min。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述的样品稀释倍数最佳为4倍。
4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述的最佳动态高压微射流处理方式为:40MPa处理两次。
5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述的最佳色谱柱为C18柱,规格为4.6mm×250mm。
6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述的高效液相色谱分析流动相最佳为0.1%三氟乙酸溶液和0.1%三氟乙酸乙腈溶液。
7.根据权利要求1所述方法,其特征在于,所述的高效液相色谱分析最佳检测波长为280nm。
8.根据权利要求1所述方法,其特征在于,最佳柱温为:25℃。
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