[发明专利]一种鉴定和区分鸡白痢沙门菌和鸡伤寒沙门菌的多重PCR检测试剂盒

说明书

本发明属于生物技术检测领域，具体涉及一种鉴定和区分鸡白痢沙门菌和鸡伤寒沙门菌的多重PCR检测试剂盒。所述试剂盒中包括stn基因检测引物、I137_14445基因检测引物和ybgL基因检测引物，本发明的试剂盒能快速高通量准确鉴定和区分鸡白痢沙门菌和鸡伤寒沙门菌，可替代传统沙门菌血清学分型和生化鉴定等复杂程序，并为鸡白痢沙门菌和鸡伤寒沙门菌的监测与实验室诊断提供了一种简单快速、重复性好的新方法。

技术领域

本发明属于生物技术检测领域，具体涉及一种快速鉴定和区分鸡白痢沙门菌和鸡伤寒沙门菌的多重PCR检测试剂盒。

背景技术

沙门菌病是公共卫生学上有重要意义的传染病之一，其病原沙门菌属于肠杆菌科，蛋、家畜和肉制品是主要传播媒介，可引起多种畜禽疾病，造成全身性败血症和肠炎。鸡白痢和鸡伤寒分别是由鸡白痢沙门菌和鸡伤寒沙门菌引起的，鸡白痢沙门菌主要感染2～3周龄的雏鸡，引起白色下痢，病死率较高，而成年鸡感染后病死率较低，但可长期带毒排毒。鸡伤寒沙门菌对雏鸡、成年鸡均可致病，以引起贫血、白细胞增多、出血为特征。因而，鸡白痢/伤寒沙门菌是我国养鸡业中危害严重的细菌。目前，根据Kauffman-White(K-W)血清型分型方法，依据沙门菌菌体抗原及鞭毛抗原的不同，沙门菌目前的血清型有2650种以上，中国已报道了292种不同的血清型，分属于35个O群。

传统的检测方法即非选择性和选择性增菌、生化特性及血清学鉴定很费力、耗时，并且鸡白痢沙门菌和鸡伤寒沙门菌还需额外的生化反应才可进行区分，需4-7天才能完成，其它如抗体检测法，虽然快速，但其高假阳性使之不适于常规检测。因此，急需一些快速、特异、敏感的检测方法，以及时发现鸡白痢沙门菌和鸡伤寒沙门菌，这对于鸡白痢和鸡伤寒的有效防控意义重大。

发明内容

针对现有技术中所存在的问题，本发明的目的在于提供一种快速鉴定和区分鸡白痢沙门菌和鸡伤寒沙门菌的多重PCR检测试剂盒及其制备和应用。

为了实现上述目的及其他相关目的，本发明采用如下技术方案：

本发明的第一方面，提供一种鉴定和区分鸡白痢沙门菌和鸡伤寒沙门菌的多重PCR检测试剂盒，所述试剂盒中包括stn基因、I137_14445基因和ybgL基因的检测引物，所述stn基因、I137_14445基因和ybgL基因的检测引物包括核苷酸序列如SEQ ID NO.1、SEQ IDNO.3和SEQ ID NO.5所示的正向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.4和SEQ IDNO.6所示的反向引物。

本发明的试剂盒采用多重PCR检测技术进行stn基因、I137_14445基因和ybgL基因检测，根据扩增及检测情况可分析判断检测对象是否属于鸡白痢沙门菌或鸡伤寒沙门菌。因此，引物的设计是本发明试剂盒的关键。

基于本发明所述试剂盒是采用PCR技术来进行检测的，所以试剂盒中还可以包括其他一些PCR所需要的常规试剂，如：无菌水(ddH₂O)、dNTP、PCR buffer、rTaq酶、样品基因组DNA提取试剂等常用PCR反应试剂中的一种或多种。由于此类PCR常用试剂均可经市场途径单独购得或者自行配置，因此具体需要将哪些试剂装配入试剂盒，可以根据客户实际需要配置，为方便起见，也可全部装配入试剂盒。

本发明的试剂盒，可以是含有独立包装的引物对，也可以是含有配置好的含有引物对的PCR检测液。

所述PCR检测液可自行配置，也可直接以市售的不含引物的通用PCR检测液加入引物获得。例如，所述试剂盒中还可以含有无菌水(ddH₂O)、dNTP、PCR buffer、rTaq酶。加入本发明的引物、待检样本DNA提取物或者或者样本菌液即可获得PCR反应体系。

优选地，所述试剂盒中还可含有阳性对照。所述阳性对照为含有鸡白痢沙门菌或鸡伤寒沙门菌基因组的DNA样本。