[发明专利]一种冷浇注法制备的光聚合人工外泌体血管、其制备方法及应用

权利要求书

1.一种冷浇注法制备光聚合人工外泌体血管的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1）将透明质酸或胶原蛋白或明胶溶解在去离子水中，搅拌溶解后，将溶液温度升至37-60℃，逐滴加入甲基丙烯酸酐，搅拌，将获得的澄清溶液在透析膜中进行透析，37-60℃干燥12-48小时，取出冷冻干燥，获得多孔固态的甲基丙烯酸酯化透明质酸或甲基丙烯酸酯化胶原蛋白或甲基丙烯酸酯化明胶，避光保存；甲基丙烯酸酐与透明质酸或胶原蛋白或明胶的质量比为（1~2）:（3~10）；

或者将透明质酸或胶原蛋白或明胶溶解在去离子水中，搅拌溶解后，将溶液温度升至37-60℃，逐滴加入酪胺和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺，搅拌，将获得的澄清溶液在透析膜中进行透析，37-60℃干燥12-48小时，取出冷冻干燥，获得多孔固态的酪胺透明质酸或酪胺胶原蛋白或酪胺明胶，避光保存；1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺、酪胺和透明质酸或胶原蛋白或明胶三者的质量比为1:（1~2）:（3~10）；

（2）将外泌体溶解于PBS缓冲液中获得浓度为2µg/µL~200µg/µL的外泌体悬液，并将步骤（1）冷冻干燥后的固体溶解于PBS缓冲液中获得水凝胶溶液，使固体浓度为0.01 g/mL~0.1g/mL，按照外泌体悬液和水凝胶溶液体积比=1: 2~200将外泌体悬液加入到水凝胶溶液中，在摇床避光混合，获得水凝胶-外泌体悬液，加入水凝胶-外泌体悬液体积的0.1%-1%的光交联引物，在摇床内避光混合从而获得凝胶前体，在避光条件下，使用针管将凝胶前体以1μL/s-10μL/s注入模具中，光引发聚合反应，反应完成后，获得完整的血管结构，在冰水浴环境中浸泡后，将人工血管剥离模具，即得。

2.根据权利要求1所述冷浇注法制备光聚合人工外泌体血管的方法，其特征在于，步骤（1）中透明质酸的分子量为2000KDa-1000000KDa；冷冻干燥是指先在冰箱中-80℃冷冻4-12小时，再在冷冻干燥机中-80℃冷冻干燥12-48小时。

3.根据权利要求1所述冷浇注法制备光聚合人工外泌体血管的方法，其特征在于，步骤（1）中所述透析膜的截留分子量为1kDa~10 kDa；所述透析膜先在15v%乙醇溶液透析24小时，再在去离子水中透析24小时。

4.根据权利要求1所述冷浇注法制备光聚合人工外泌体血管的方法，其特征在于，步骤（2）中所述光交联引物为Irgacure 2959或VA-086或曙红Y或RU/SPS，光引发的波长为350-550nm。

5.根据权利要求1所述冷浇注法制备光聚合人工外泌体血管的方法，其特征在于，所述摇床以40~200圈/分，4℃~40℃的环境下进行。

6.根据权利要求1所述冷浇注法制备光聚合人工外泌体血管的方法，其特征在于，所述外泌体来源于血液血清、骨髓间充质干细胞、脂肪干细胞、血管内皮细胞或血管收缩型平滑肌细胞；所述外泌体粒径尺寸为40nm~200nm，提取方式为超速离心、超滤和试剂沉淀。

7.根据权利要求1所述冷浇注法制备光聚合人工外泌体血管的方法，其特征在于，步骤（2）中所述PBS缓冲液的pH=7.4。

8.权利要求1至7任一项所述的制备方法制得的冷浇注光聚合人工外泌体血管，其特征在于，所述血管内径为1mm~10mm，壁厚为500μm~2mm。

9.权利要求8所述的冷浇注光聚合人工外泌体血管在人工血管中的应用。