[发明专利]一种促牙髓-牙本质复合体再生支架及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种促牙髓-牙本质复合体再生的牙髓仿生型脱落乳牙干细胞细胞外基质支架（extracellular matrix scaffold of stem cells from exfoliated deciduous teeth，SHED-ECMS）制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）经过培养的脱落乳牙干细胞（stem cells from exfoliated deciduous teeth,SHED），接种于细胞板，待细胞生长至80%汇合，更换细胞外基质诱导培养基，连续培养14d，见皿底形成白色膜样物质，边缘卷曲时，表明细胞膜片成熟，得到SHED细胞膜片；

2）SHED细胞膜片表面接种SHED悬液，待过夜细胞贴壁后，将细胞膜片卷裹于模具，培养7d后抽出模具，继续培养7d，SHED细胞膜片折叠缠绕，获得牙髓样条状SHED细胞聚合体；

3）SHED细胞聚合体用PBS冲洗，3%Triton X-100在37℃条件下脱细胞处理72 h，PBS洗3min×3次，获得牙髓仿生型SHED-ECMS；

所述SHED-ECMS在制备促牙髓-牙本质复合体再生支架或材料中的应用。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述SHED-ECMS具有疏松多孔均质的细胞外基质结构，为参与牙髓再生种子细胞定植生长提供空间支架，促进种子细胞迁移、归巢至牙齿根管内，所述的牙髓再生种子细胞包括牙源性干细胞和颌骨骨髓源性干细胞。

3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，SHED-ECMS富含牙髓发育早期分子信号生物活性成分，能够诱导受损牙髓组织重启发育过程，激活牙源性干细胞的干性，促进干细胞增殖和分化，形成牙髓-牙本质复合体。

4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，SHED-ECMS富含成牙本质特征性蛋白，包括DSPP和DMP1，能够定向诱导种子细胞向成牙本质细胞向分化，以形成牙髓-牙本质复合体，减少根管内不规则钙化物形成。

5.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，SHED-ECMS富含牙髓再生相关细胞因子生物活性成分，为牙髓再生提供最适宜最近似的生理性微环境，以促进牙髓-牙本质复合体再生。

6.一种促牙髓-牙本质复合体再生功能产品，其特征在于，包含权利要求1中所述SHED-ECMS，所述的SHED-ECMS来源于SHED分泌形成的细胞外基质。

7.如权利要求6所述的产品，其特征在于，所述的SHED是来源于人体唯一生理性脱落器官-乳牙牙髓组织，获取容易，SHED具有独特而优越的干细胞性能，包括更强的体外扩增能力，独特的成牙本质向分化、成神经向分化以及促血管再生能力，更重要的是SHED表达大量牙髓发育相关的分子信号，在牙髓发育与再生过程中发挥重要作用。

8.如权利要求6所述的产品，其特征在于，所述的SHED-ECMS由牙源性干细胞分泌的细胞外基质制备而成，同时能够对牙髓组织形态及生物活性成分双重仿生。

9.如权利要求6所述的产品，其特征在于，所述的SHED-ECMS形态尺寸根据牙位和髓腔大小实现个性化制备，来源于纯天然细胞成分。