[发明专利]细胞储存液及其应用

说明书

本发明涉及细胞储存液及其应用。本发明提供的细胞储存液能够使细胞在常温下保存或运输7天以上，便于保存和运输，以及复性。尤其是对低温敏感的细胞，例如胚胎干细胞，经过该细胞储存液7天保存或运输后仍然有约15％的细胞存活，并能够快速恢复细胞活性。

技术领域

本发明生物技术领域，具体地，本发明涉及细胞储存液及其应用。

背景技术

细胞通常在冻存后使用液氮或干冰运输，或者细胞在用细胞培养液灌满培养瓶后进行常温运输。这些运输方式均存在一些缺点，比如液氮和干冰下冷冻运输虽然可保持较高的生命活性，但液氮和干冰的运输成本高，而且在包括中国在内的一些国家液氮与干冰归于九类危险品，运输受限。细胞培养液灌满方式细胞存活时间短，不适合长时间运输。

现有文献The analysis of viability for mammalian cells treated atdifferent temperatures and its application in cell shipment(PLoS One；2017；12(4):e0176120)公开了小鼠胚胎干细胞在含有15％knockout^TM血清替代物的knockout^TMDMEM/F12培养基中培养，0.1mM非必需氨基酸、2mM L-谷氨酰胺和0.05mM2-巯基乙醇、2ng/mL人白血病抑制因子、0.8μM抑制剂PD0325901和3μM抑制剂CHIR 99021。在低温下，第四天干细胞的活力降低至40-50％。干细胞保存的时间短。

现有专利文献公开号CN107306936A公开了一种常温条件下保存运输干细胞的方法及其所使用的基质。保存运输干细胞的方法包括：干细胞团块形成步骤；干细胞团块培养步骤；干细胞团块制品封装运输步骤；干细胞团块基质去除步骤。可见，该方法需要形成干细胞团块和去除干细胞团块基质的过程，过程比较复杂。

发明内容

本发明的目的在于提供一种细胞储存液，增加细胞在常温下的保存或运输时间。

第一方面，本公开提供了一种细胞储存液，所述细胞储存液包括：基础培养基、胎牛血清、MEK抑制剂和ROCK抑制剂。

在一些实施方式中，所述细胞储存液包括：

在一些实施方式中，所述MEK抑制剂选自ATP竞争性MEK抑制剂和非ATP竞争性MEK抑制剂。在一些实施方式中，所述MEK抑制剂为非ATP竞争性MEK抑制剂。

在一些实施方式中，所述非ATP竞争性MEK抑制剂选自PD0325901、PD98059、U0126和ARRY-142886，及其任意组合。

在一些实施方式中，所述非ATP竞争性MEK抑制剂为PD0325901。在一些实施方式中，所述PD0325901在所述细胞储存液中的浓度为500-5000nM/L，优选为1000-3000nM/L。

在一些实施方式中，所述ROCK抑制剂选自Y-27632和H-1152，及其任意组合。

在一些实施方式中，所述ROCK抑制剂为Y-27632。在一些实施方式中，所述Y-27632在所述细胞储存液中的浓度为500-5000nM/L，优选为500-2000nM/L。

在一些实施方式中，所述基础培养基选自DMEM、DMEM/F12、MEM、α-MEM和Opti-MEM^TMI减血清培养基，及其任意组合。

在一些实施方式中，所述基础培养基为Opti-MEM^TM I减血清培养基。

在一些实施方式中，所述细胞储存液还包括：N-2补充剂和/或B-27补充剂，优选为N-2补充剂和B-27补充剂。