[发明专利]一种检测猴D型逆转录病毒的引物探针组合物、试剂盒及检测方法

说明书

本发明属于分子生物学技术领域，具体提供了一种检测猴D型逆转录病毒的引物探针组合物，包括反转录引物SRV‑RT.RP，检测猴D型逆转录病毒4型的上游引物P‑SRV4‑F、下游引物P‑SRV4‑R和探针SRV4‑P，检测猴D型逆转录病毒5型的上游引物P‑SRV5‑F、下游引物P‑SRV5‑R和探针SRV5‑P，检测猴D型逆转录病毒8型的上游引物P‑SRV8‑F、下游引物P‑SRV8‑R和探针SRV8‑P。本发明还提供了包括该引物探针组合物的试剂盒及采用该引物探针组合物同时检测多血清型猴D型逆转录病毒的方法，特异性强、灵敏度高，极大的缩短了检测时间，为采取有针对性的综合防控措施提供参考数据，利于实验猴病原体SRV的快速检测和流行病学的调查与预防。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种检测猴D型逆转录病毒的引物探针组合物、试剂盒及检测方法。

背景技术

猴逆转录病毒(Simian type D retrovirus，SRV)属于逆转录病毒科，肿瘤病毒亚科的D型病毒，也叫猴D型逆转录病毒。SRV是负链RNA病毒，内含逆转录酶，该病毒在自然宿主猕猴中致病率高，容易引发猴群大批死亡，是一种严重干扰猴健康的传染性病原。

猕猴和人类在形态结构、生理生化等方面相似度极高，是解决人类某些疾病和发病机制的理想实验动物。我国是猕猴资源的富产国，南方多个省份的猴人工养殖场已成为国际试验用猴的出口基地，近年来医药技术保持高速发展态势，对实验猴的需求持续增加，然而猴群的引入和出口均存在一定的安全隐患，需要严格把控引入猴的检疫，定期监控猴群的病原体。SRV是SPF级实验猴必检病原体之一，目前SRV被发现存在8个血清型，我国目前发现流行的血清型为猴逆转录病毒血清型4、血清型5和血清型8，给实验猴和使用单位造成了巨大的影响。

为了保证饲养人员和科研人员的安全性，保证实验猴的质量和健康，本发明建立了一种可同时检测猴D型逆转录病毒4型、5型和8型的三重荧光定量PCR引物探针组合物，便捷、高效、灵敏、特异性强，利于我国实验猴病原体SRV的快速检测和流行病学的调查与预防。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术不适用于同时检测样本中4型、5型和8型血清型猴D型逆转录病毒的问题。

为此，本发明提供了一种检测猴D型逆转录病毒的引物探针组合物，包括反转录引物SRV-RT.RP，检测猴D型逆转录病毒4型的上游引物P-SRV4-F、下游引物P-SRV4-R和探针SRV4-P，检测猴D型逆转录病毒5型的上游引物P-SRV5-F、下游引物P-SRV5-R和探针SRV5-P，检测猴D型逆转录病毒8型的上游引物P-SRV8-F、下游引物P-SRV8-R和探针SRV8-P；

所述SRV-RT.RP的序列为

5’-CTTCCTGGTGTGGCTCTAAT-3’

5’-CTTCCTGGTGTGGCTCTAGC-3’；

所述P-SRV4-F的序列为5’-TGCCTCACACCCCTCGC-3’；

所述P-SRV4-R的序列为5’-CCTGACCTTGTCCATCTAC-3’；

所述SRV4-P的序列为5’-CACAGCACTTCCCTCTTG-3’；

所述P-SRV5-F的序列为5’-TGACCCTGACGATGACGAC-3’；

所述P-SRV5-R的序列为5’-TTGTAAGGAGGTGGACGAGTT-3’；

所述SRV5-P的序列为5’-TATCTGGCTGCCGCATCCG-3’；

所述P-SRV8-F的序列为5’-CTGCTATTCGCCCTTAC-3’；