[发明专利]一种用于SFTS病毒核酸检测的探针和试纸条及使用方法

说明书

本发明公开了一种用于SFTS病毒核酸检测的探针和试纸条及使用方法，包括探针H1和探针H2，用于特异性检测SFTS病毒；本发明还公开了一种用于SFTS病毒核酸检测的试纸条及使用方法，配合上述探针，通过层析法高效检测SFTS病毒。本发明通过特异性探针配合侧向免疫层析试纸条，对SFTS病毒进行检测，能够在15分钟内获得检测结果，无需RNA提取等繁琐步骤，操作方便高效，且特异性强，灵敏度高。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种用于SFTS病毒核酸检测的探针和试纸条及使用方法。

背景技术

严重发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)是一种新型布尼亚病毒。近年来，SFTSV感染病例数稳步增长。由于SFTSV可以在人与人之间传播，它将使公众面临感染风险。在2018年重点疾病蓝图清单年度审查中，世界卫生组织将SFTSV感染列为紧急情况下研发的重点疾病。然而，SFTSV的发病机制仍不清楚，还没有特定的治疗方法或疫苗来对抗SFTSV的感染。因此严重发热伴血小板减少综合征病毒的检测对SFTS感染防治具有重要意义，预防病症，控制病毒传播，有效管理患者。

目前，临床实验室检查主要以核酸检测和血清抗体检测为主。血清抗体检测主要用于严重发热伴血小板减少综合征的筛查，但是易出现假阴性结果。对于新型布尼亚病毒IgG抗体阳性者应进一步检SFTSV-RNA，以确定是否为现症感染，然而核酸PCR方法复杂，对于环境和技术人员要求严格。发热伴血小板减少综合征防治指南(2010版)指出，SFTSV的实验室检查仍然以SFTSV-RNA检测作为金标准，应用最为广泛的q-PCR方法虽然技术成熟，特异性高。但是，q-PCR需要在精密的大型荧光定量PCR仪上进行长时操作，对于操作人员有一定的技术要求，其仪器昂贵，耗时较长很难在小型医院及偏远地区开展检测，因此PCR很难实现现场即时检测(P OCT)。

发明内容

有鉴于此，本发明期望提供一种用于SFTS病毒核酸检测的探针和试纸条及使用方法，通过侧向免疫层析试纸条，无需RNA提取，在等温无酶环境下快速、高特异性、高灵敏度地检测SFTS核酸，实现SFTS现场即时检测。

为达到上述目的，本发明的技术方案是这样实现的：

一种用于SFTS病毒核酸检测的探针H1和探针H2序列分别如下：

H1:CTGTTGACTCCTCTTTGTTCTTCAACAGTCACCCCAGAACAAAGA GGAG

H2:TTGTTCTGGGGTGACTGTTGAAGAACAAAGAGGAGTCAACAGTC ACCCC

进一步地，所述探针H1和探针H2均为发夹结构，探针H1的5’端由地高辛修饰，探针H2的5’端由生物素修饰。

进一步地，所述探针与目的检测序列混合，形成H1+H2杂交双链。

本发明还另外提供一种用于SFTS病毒核酸检测的试纸条，所述试纸条为侧向免疫层析试纸条，检测上述H1+H2杂交双链。

进一步地，所述试纸条依次设置样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸收垫。

进一步地，所述结合垫上包被AlexaFluor647荧光素和亲和素双标记的纳米微球；所述硝酸纤维素膜标有检测线和质控线。

这里，检测线(test line)标记为“T”，质控线(control line)标记为“C”。

进一步地，所述样品垫、结合垫为玻璃纤维材质；所述吸收垫为纤维素材质。

进一步地，所述检测线上喷洒抗地高辛，所述质控线上涂抹生物素。

本发明还另外提供一种用于SFTS病毒核酸检测的试纸条的使用方法，使用上述试纸条，包括以下步骤：