[发明专利]基于NanoSPR生物芯片的定性或定量检测人或动物体内中和抗体的方法

权利要求书

1.基于NanoSPR生物芯片的检测人或动物体内中和抗体的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、取集成有纳米等离子共振生物芯片的芯片微孔板，在每个微孔的NanoSPR生物芯片上孵育、修饰病毒片段蛋白或受体蛋白；将待测样本梯度稀释后待用；

S2、将步骤S1制备的待测样本梯度稀释液加入到步骤S1所得的芯片微孔板中反应；用酶标仪记录数据初始状态检测值；反应一段时间后，在芯片微孔板中加入标记有受体蛋白或病毒片段的胶体金溶液进行反应，反应结束后用酶标仪记录终点状态检测值；

所述中和抗体为病原微生物侵入人或动物体内时产生的具有相应的中和能力的抗体，所述病原微生物为传染病类病原微生物或病毒载体；所述受体蛋白是与病毒片段蛋白特异性结合的蛋白。

2.根据权利要求1所述的基于NanoSPR生物芯片的检测人或动物体内中和抗体的方法，其特征在于，步骤S1具体为：取集成有NanoSPR生物芯片的芯片微孔板，在每个微孔的NanoSPR生物芯片上先用病毒片段蛋白或受体蛋白进行第一次孵育，孵育温度4-37℃，孵育时间2-24h；用缓冲液清洗并氮气吹干后，加入酪蛋白封闭液进行第二次孵育，孵育温度4-37℃，孵育时间0.5-2h；用缓冲液清洗并氮气吹干后，备用；将待测样本用稀释液梯度稀释后待用。

3.根据权利要求1所述的基于NanoSPR生物芯片的检测人或动物体内中和抗体的方法，其特征在于，步骤S1中，稀释待测样本的稀释液是质量分数2％NaCl的PBST缓冲液。

4.根据权利要求1所述的基于NanoSPR生物芯片的检测人或动物体内中和抗体的方法，其特征在于，步骤S2中，标记有受体蛋白或病毒片段蛋白的胶体金溶液的制备方法具体为：取1ml胶体金溶液，加入6-20μL 0.1M碳酸钾溶液，混匀；然后加入1-10μg受体蛋白或病毒片段蛋白混匀、静置；再加入5-15μL10％的PEG 20000混匀，静置；冷冻离心，去上清后取沉淀加入100-500μL复溶液混匀。

5.根据权利要求4所述的基于NanoSPR生物芯片的检测人或动物体内中和抗体的方法，其特征在于，步骤S2中制备标记有受体蛋白或病毒片段蛋白的胶体金溶液时，冷冻离心的条件为2-8℃、7000-10000rpm离心20-40min。

6.根据权利要求4或5所述的基于NanoSPR生物芯片的检测人或动物体内中和抗体的方法，其特征在于，步骤S2中制备标记有受体蛋白或病毒片段蛋白的胶体金溶液时，所述复溶液是含有质量分数1-5％的蔗糖、质量分数1-5％葡萄糖、质量分数0.5-4％甘露醇、质量分数0.1-5％BSA的PBST缓冲液。

7.根据权利要求1所述的基于NanoSPR生物芯片的检测人或动物体内中和抗体的方法，其特征在于，所述传染病类病原微生物为传染性非典型肺炎、艾滋病、病毒性肝炎、脊髓灰质炎、人感染高致病性禽流感、麻疹、流行性出血热、狂犬病、流行性乙型脑炎、登革热、炭疽、细菌性和阿米巴性痢疾、肺结核、伤寒和副伤寒、流行性脑脊髓膜炎、百日咳、白喉、新生儿破伤风、猩红热、布鲁氏菌病、淋病、梅毒、钩端螺旋体病、血吸虫病、疟疾、人感染H7N9禽流感、新型冠状病毒肺炎；所述病毒载体为腺病毒、腺相关病毒、慢病毒。