[发明专利]一种基因增强型免疫细胞治疗肝硬化的方法

说明书

本发明涉及一种基因增强型免疫细胞治疗肝硬化的方法。本发明将IFN‑α导入到NK细胞中，能够增强NK细胞的活性，继而可通过杀伤活化HSC从而达到抗纤维化目的，能够抑制肝纤维化是防止肝硬化重要的治疗手段。进一步的所述转基因的NK细胞与特异性针对IGFBP7的单克隆抗体联用后能够抑制肝星状细胞纤维连接蛋白的表达增强肝星状细胞的凋亡进而较好的实现抗肝纤维化，进而实现抗肝硬化的效果。

技术领域

本申请涉及生物领域，更具体的涉及一种基因增强型免疫细胞治疗肝硬化的方法。

背景技术

肝硬化是临床常见的慢性进行性肝病，由一种或多种病因长期或反复作用形成的弥漫性肝损害。在我国大多数为肝炎后肝硬化，少部分为酒精性肝硬化和血吸虫性肝硬化。病理组织学上有广泛的肝细胞坏死、残存肝细胞结节性再生、结缔组织增生与纤维隔形成，导致肝小叶结构破坏和假小叶形成，肝脏逐渐变形、变硬而发展为肝硬化。早期由于肝脏代偿功能较强可无明显症状，后期则以肝功能损害和门脉高压为主要表现，并有多系统受累，晚期常出现上消化道出血、肝性脑病、继发感染、脾功能亢进、腹水、癌变等并发症。

肝纤维化与肝硬化是慢性肝病发展过程中的不同的病理阶段。肝纤维化是肝脏胶原纤维组织过度的沉积的结果；肝硬化是严重肝纤维化的结果。肝硬化肝细胞、血管、胆管等正常组织结构发生紊乱，病理表现为假小叶结构。慢性肝炎反复活动就容易形成肝纤维化，肝纤维化是肝硬化的必经之路。肝纤维化时，纤维组织过度沉积，但肝脏的基本结构没有发生质的改变；而肝硬化表现纤维组织过度沉积，而且肝脏的基本结构已被破坏。因此，肝纤维化及早期的肝硬化可以逆转，但中晚期肝硬化则难以逆转。

肝纤维化是机体对慢性肝损伤的一种修复反应，是慢性肝病的共有病理变化。肝纤维化的特征改变是肝脏内细胞外基质的过度沉积。目前的研究证实肝星状细胞的激活是肝纤维化发生的中心环节。各种因素通过不同方式和途径作用于肝脏中的HSCs以及纤维形成细胞导致其生物学及功能变化，引起肝纤维化。各种细胞因子、过氧化产物和ECM成分等与HSCs受体结合后，激活一系列细胞内分子，最终通过调控HSCs基因表达调节肝纤维化过程。TGF-β是以无活性形式合成和分泌的。活化的TGF-β结合I型和II型受体形成异二聚体。TGF-β的活化引起TGF-βRII的去磷酸化，进而引起细胞质Smad转导子磷酸化，导致靶标基因的转录，Smad7能拮抗细胞质中Smad级联反应，限制TGF-β效应。Smad7的过度表达可抑制HSCs转分化并将其阻止在静止阶段。通过分析HSCs中Smad7依赖的mRNA的表达谱，鉴定出分化抑制子1基因。Smad7异常表达可明显减少Id1的表达，相反地，Id1在HSCs中的高表达将促进细胞活化并且绕过Smad7依赖的转分化抑制。Id1作为HSCs中TGF-β/激活素受体样激酶1/Smad7的目标基因，有可能是一个调控转分化的关键因子。

此外，近来NK细胞与肝纤维化的关系日益受到重视，部分研究表明激活NK细胞可起到抗肝纤维化作用。首先，NK细胞的消耗可加速CC14或1，4-二氢-3，5-吡啶二甲酸二乙酯(DDC)诱导的肝纤维化进程。其次，缺乏B/T/NK细胞的SCID小鼠比仅缺乏B/T细胞的SCID小鼠肝纤维化程度更严重。第三，polyI：C的治疗可活化NK细胞并抑制肝纤维化，而NK细胞数量的减少可拮抗polyI：C的抗纤维化效应，提示NK细胞有助于polyI：C抗纤维化作用。在慢性肝损伤时，NK细胞可能较先杀伤肝内活化的HSCs，从而起到抗肝纤维化作用。总之，在NK细胞与HSC的交互作用过程中，活化的HSC激活NK细胞，NK细胞又通过多种途径抑制HSC的活性并产生IFN，进一步激活同种细胞，发挥改善肝纤维化的作用。

但是目前，采用特异性的抑制药物与NK细胞来共同抑制干纤维化仍有待进一步的研究。

发明内容

发明人通过研究发现，IFN-α能够增强NK细胞的活性，继而可通过杀伤活化HSC从而达到抗纤维化目的。而抑制肝纤维化是防止肝硬化重要的治疗手段。

一方面，本发明提供了一种转IFN-α基因的NK细胞。