[发明专利]从中华雪胆中提取的具有抗肠炎活性的葫芦烷型四环三萜类化合物及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种从中华雪胆中提取葫芦烷型四环三萜类化合物，其特征在于，包括化合物1和化合物2，其分子式均为C₃₀H₄₆O₆，不饱和度均为8，结构式分别为：

2.权利要求1所述的从中华雪胆中提取葫芦烷型四环三萜类化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)取干燥的中华雪胆块根15.0kg，每次加70％乙醇溶液80～300L，回流提取1～4次，每次提取1～4h，合并提取液，减压浓缩，得到相当于生药量1.0～3.0g/mL的样品溶液；

(2)在步骤(1)的样品溶液中加5～10L分散成悬浮液，用乙酸乙酯重复萃取3～10次，每次用量15～30L，充分振摇，静置分层，收集乙酸乙酯层，减压回收溶剂，得到干燥固体组分Fr._EtOAc；

(3)组分Fr._EtOAc经80～300目硅胶柱色谱，硅胶柱d＝6～10cm、H＝30～50cm，用体积比1:0、50:1、25:1、10:1、5:1、0:1的二氯甲烷-甲醇进行梯度洗脱，每个比例洗脱3～8个柱体积，收集10:1的洗脱液，减压回收溶剂，得到干燥粉末组分Fr._EtOAc-4；

(4)组分Fr._EtOAc-4经中压FlashMCI柱色谱，用体积比30:70、50:50、70:30、90:10的甲醇-水进行梯度洗脱，流速20～25mL/min，每个比例洗脱3～10个柱体积，收集70:30的洗脱液，减压回收溶剂，得到干燥粉末组分Fr._EtOAc-4-D；

(5)组分Fr._EtOAc-4-D经中压FlashODS柱色谱，用体积比60:40、70:30、80:20的甲醇-水进行梯度洗脱，流速10～20mL/min，每个比例洗脱5～10个柱体积，收集60:40的洗脱液，减压回收溶剂，得到干燥粉末组分Fr._EtOAc-4-D-2；

(6)组分Fr._EtOAc-4-D-2用甲醇溶解成50mg/mL的样品溶液，经C18柱在半制备HPLC上进一步分离，洗脱溶剂为体积比57:43的甲醇-水，3mL/min，分别收集44.36、50.89min的色谱峰，减压回收溶剂，得到干燥粉末状的化合物1和化合物2。