[发明专利]一种枯草芽孢杆菌小RNA调控系统构建方法

权利要求书

1.一种靶向枯草芽孢杆菌内源或外源基因的非编码sRNA，其特征在于，所述非编码sRNA由长度为24nt的靶向基因互补序列、发卡结构及9个polyU组成；所述发卡结构的茎长为8bp或11bp，环长为4nt，总体自由能大于-15kcal/mol。

2.根据权利要求1所述的非编码sRNA，其特征在于，所述非编码基因的sRNA的发卡结构及9个polyU的区域分别如Seq ID NO.1～5、Seq ID NO.7～14中的非靶向基因互补序列区域所示。

3.根据权利要求1或2所述的非编码sRNA，其特征在于，所述内源基因包括枯草芽孢杆菌基因组上的基因；所述外源基因包括可在枯草芽孢杆菌中表达的任一非枯草芽孢杆菌来源的基因。

4.一种抑制绿色荧光蛋白表达的方法，其特征在于，所述方法是在表达绿色荧光蛋白的重组枯草芽孢杆菌中，转入含有序列Seq ID NO.3～5任一所示的非编码sRNA的重组表达载体。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述重组表达载体为P43NMK，利用P₄₃启动所述非编码sRNA的表达。

6.一种抑制枯草芽孢杆菌内源基因表达的方法，其特征在于，所述方法是利用所述的非编码sRNA抑制内源基因的表达。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述内源基因包括ftsZ、comER、acoA、bdhA、aslR、aslD、ldh、pta。

8.一种提高乙偶姻产量的方法，其特征在于，所述方法是在枯草芽孢杆菌中表达含有与乙偶姻代谢相关的基因的靶向序列的非编码sRNA；所述与乙偶姻代谢相关的基因包括aslD、ldh、pta、acoA、bdhA。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，在枯草芽孢杆菌中表达SEQ ID NO.10～14任一所示的非编码sRNA。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，将所述枯草芽孢杆菌在含有8～12g/L酵母提取物，5～6g/L胰蛋白胨，5～6g/L(NH₄)₂SO₄，10～15g/L K₂HPO₄·3H₂O，1～5g/L KH₂PO₄，1～5g/L MgSO₄，10～30g/L葡萄糖，5～15mL/L微量元素。