[发明专利]一种RNA水平的抗辐射药物筛选方法在审
| 申请号: | 202210911932.6 | 申请日: | 2022-07-29 |
| 公开(公告)号: | CN115181788A | 公开(公告)日: | 2022-10-14 |
| 发明(设计)人: | 张艳丽;夏玉军;赵毅;闫志勇;任书荣;吕锐 | 申请(专利权)人: | 青岛大学 |
| 主分类号: | C12Q1/686 | 分类号: | C12Q1/686;C12Q1/6888;C12Q1/02 |
| 代理公司: | 青岛高晓专利事务所(普通合伙) 37104 | 代理人: | 贾景然 |
| 地址: | 266061 山*** | 国省代码: | 山东;37 |
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| 摘要: | |||
| 搜索关键词: | 一种 rna 水平 辐射 药物 筛选 方法 | ||
1.一种RNA水平的抗辐射药物筛选方法,其特征在于,在筛选待检测药物时,提取经辐射后用药的细胞RNA,进行反转录PCR,通过PCR产物电泳结果是否出现非特异性条带作为判断该药物是否具有抗辐射作用的依据,如果没有出现非特异性条带,则说明该药物具有抗辐射作用;如果出现非特异性条带,则说明该药物没有抗辐射作用。
2.根据权利要求1所述的RNA水平的抗辐射药物筛选方法,其特征在于,具体步骤为:
(1)获取细胞,将其随机分为3组,第一组为无处理组,不对细胞进行任何处理;第二组为辐射组,对细胞进行辐射;第三组为辐射+用药组,对细胞进行辐射后加入待检测药物;
(2)处理后的3组细胞分别提取总RNA,进行反转录PCR;
(3)将PCR产物进行凝胶电泳,电泳结果显示,无处理组不出现非特异性扩增条带;辐射组会出现2Kb的非特异性条带;如果辐射+用药组没有出现非特异性条带,则说明该药物具有抗辐射能力。
3.根据权利要求2所述的RNA水平的抗辐射药物筛选方法,其特征在于,所述细胞为动物细胞株或动物体内分离细胞。
4.根据权利要求2所述的RNA水平的抗辐射药物筛选方法,其特征在于,所述辐射是指进行高能X-ray或240nm-280nm波长紫外线辐射。
5.根据权利要求4所述的RNA水平的抗辐射药物筛选方法,其特征在于,所述X-ray辐射的条件和参数:6MV X-ray,照射距离100cm,剂量率6Gy/min,总剂量3.5Gy;紫外线辐射的条件和参数:波长253.7nm,照射距离50cm,照射强度360μw/cm2,照射时间20s。
6.根据权利要求2所述的RNA水平的抗辐射药物筛选方法,其特征在于,所述第三组完成辐射后1h加入药物,然后药物作用时间为1h-2h。
7.根据权利要求1或2任一所述的RNA水平的抗辐射药物筛选方法,其特征在于,所述反转录PCR时,设计引物扩增管家基因,作为PCR反应体系和反应条件无误的指示;PCR产物长度控制在350-600bp之间。
8.根据权利要求1或2任一所述的RNA水平的抗辐射药物筛选方法,其特征在于,所述PCR反应体系包括模板和PCR试剂;PCR循环次数为17-24个循环,每一个循环包含的延伸时间为30s。
9.根据权利要求1或2任一所述的RNA水平的抗辐射药物筛选方法,其特征在于,所述PCR反应体系不包括引物。
10.根据权利要求8所述的RNA水平的抗辐射药物筛选方法,其特征在于,所述模板为反转录得到的cDNA,当PCR反应体系25μl时,模板量为0.2μl-1.5μl。
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