[发明专利]一种小分子肽及其作为激动剂、以及在抗癌药物中的应用

说明书

本发明公开了一种小分子肽及其作为激动剂、以及在抗癌药物中的应用，主要涉及生物工程领域。以PD‑L1的氨基酸序列270‑284为模板，与绿色荧光蛋白融合，构建并获得PD‑L1蛋白S279D高磷酸化小肽Peptide。可作为激动剂竞争性抑制PD‑L1与IGFBP3的蛋白质水平相互作用，以便维持IGFBP3蛋白的抑癌功能。

技术领域

本发明涉及生物工程领域，具体是一种小分子肽及其作为激动剂、以及在抗癌药物中的应用。

背景技术

PD-L1单抗的应用在多种恶性肿瘤中取得了令人满意的治疗效果，但对骨肉瘤(OS)的治疗效果不尽人意。近年来研究发现PD-L1除了大家熟悉的免疫调节作用外，其非免疫功能在恶性肿瘤的发生发展中起重要作用。但是骨肉瘤(OS)细胞内PD-L1通过其在279位点的磷酸化作用能够与IGFBP3相结合。

如果对骨肉瘤细胞内提取出来的蛋白质进行质谱分析，可以发现其在蛋白质水平可以与IGFBP3蛋白发挥相互作用；该相互作用包括：内源性细胞内的PD-L1可以和IGFBP3结合(通过在MNNG/HOS和U-2OS骨肉瘤细胞中进行免疫共沉淀(Co-IP)实验，利用IGFBP3抗体去富集沉淀IGFBP3蛋白，结果发现PD-L1可以被沉淀下来而被证明)；细胞内的PD-L1可以和IGFBP3结合(通过利用PD-L1抗体去富集沉淀PD-L1蛋白，IGFBP3也可以被沉淀下来而被证明)。

根据Pubmed上的基因和蛋白序列信息，将PD-L1蛋白划分为四个肽段，(A肽段1-17，B肽段17-148，C肽段149-244，D肽段245-290)；利用生物学技术构建A肽段1-17，B肽段17-148，C肽段149-244，只有D肽段245-290序列可以将IGFBP3沉淀下来，这说明两者结合位点可能发生在PD-L1的245-290序列。通过dataset分析以及在MNNG/HOS骨肉瘤细胞中进行免疫共沉淀(Co-IP)实验验证，确定PD-L1通过其279位点的磷酸化与IGFBP3相结合。

发明内容

本发明的目的在于提供一种小分子肽及其作为激动剂、以及在抗癌药物中的应用，它可以竞争性抑制PD-L1与IGFBP3的蛋白质水平相互作用，以便维持IGFBP3蛋白的抑癌功能。

本发明为实现上述目的，通过以下技术方案实现：

一种小分子肽，所述小分子肽的氨基酸序列为FITC-C6-KKCGIQDTNDKKQSD。

所述小分子肽为以PD-L1的氨基酸序列270-284为模板合成小肽，将位点279S突变为高磷酸化状态的279D，与绿色荧光蛋白融合，构建并获得PD-L1蛋白S279D高磷酸化小肽Peptide。

上述小分子肽在作为IGFBP3蛋白特异性激动剂的应用。

上述小分子肽在作为抗癌药物中的应用。

对比现有技术，本发明的有益效果在于：

IGFBP3蛋白作为抑癌蛋白，本小分子肽能为其提供特异性针对IGFBP3蛋白的激动剂；可以维持IGFBP3的抑癌功能从而对骨肉瘤起到良好的治疗效果。从而在抗癌药物中能够作为辅助药剂进行使用，提高IGFBP3蛋白的抗癌效果。

附图说明

图1是本发明实施例1的小分子肽的构建示意图。

图2是本发明的实施例2的纯度检测结果。

图3是本发明的实施例2的纯度检测结果。

图4是本发明实施例3的蛋白电泳试验结果示意图。

图5是本发明实施例3细胞活力检测CCK8结果示意图。

图6是本发明实施例3平板克隆实验结果示意图。