[发明专利]一种检测四种猫腹泻相关病毒的多重荧光PCR引物探针组、试剂盒及应用

说明书

本发明公开了一种检测四种猫腹泻相关病毒的多重荧光PCR引物探针组、试剂盒及应用，属于生物信息检测技术领域。该引物探针组包括检测猫星状病毒的如SEQ IDNO：1‑3所示的引物探针组；检测猫博卡病毒1型的如SEQ ID NO：4‑6所示的引物探针组；检测猫库布病毒的如SEQ ID NO：7‑9所示的引物探针组；检测猫细小病毒的如SEQ ID NO：10‑12所示的引物探针组。本发明能同时检测并鉴别猫细小病毒、猫博卡病毒1型、猫库布病毒和猫星状病毒，具有良好的灵敏性、特异性和重复性。并且首次提供了猫库布病毒的荧光定量PCR检测方法，填补了该病毒检测缺口，完善了针对猫腹泻病毒临床诊断的医疗体系。

技术领域

本发明涉及生物信息检测技术领域，特别是涉及一种检测四种猫腹泻相关病毒的多重荧光PCR引物探针组、试剂盒及应用。

背景技术

病毒性腹泻是猫常见的疾病，根据相关报道，大部分腹泻猫存在肠道病毒合并感染的情况。猫细小被认为是导致腹泻的主要原因，目前临床诊断仅针对猫细小病毒(Felineparvovirus，FPV)具有较完善的诊断与诊疗系统，2018年后陆续出现报道的猫库布病毒(Feline kobuvirus，FeKoV)，猫博卡病毒(Feline bocavirus，FBoV)和新型猫星状病毒(Feline astrovirus，FeAstV)，这些病毒在针对腹泻猫的病原学调查中易被忽略。

猫细小病毒是一种小型的，无包膜的单链DNA病毒，是食肉动物原病毒属1的成员，属于细小病毒科原病毒属。具有高度传染性，主要通过粪口途径感染六月龄以下的幼猫，可造成严重的腹泻和免疫抑制疾病，死亡率高达25％-90％，呈急性发作时死亡率高达100％，在全世界范围内呈大范围流行。猫博卡病毒属于博卡病毒属的肉食动物博卡病毒，目前猫博卡病毒已被分为1、2、3型，猫博卡病毒1型在腹泻症状猫中呈高流行率，主要导致家猫出血性肠炎，与猫细小病毒共同感染的情况下会出现更严重的临床表现。猫库布病毒是一种小的球型非包膜RNA病毒，属于小核糖核酸病毒科新建立的一个属。猫库布病毒在腹泻猫粪便中检出，随后的报道中发现了猫库布病毒与猫细小病毒和猫冠状病毒较为普遍的混合感染现象，猫库布病毒作为一种新型病毒已经成为猫肠道病毒的常见部分，但目前对其的检测方法尚未深入开发，其致病机理同时缺乏相关研究报道。猫星状病毒是一种小型的，无包膜的单链RNA病毒，分类为星状病毒2型，是一种已知的常见的猫肠道病毒。在人类中，星状病毒感染主要引起婴儿腹泻，是婴幼儿病毒性肠炎的第二位病因，同时有研究发现猫星状病毒会造成人的隐形感染。星状病毒由于其病毒特性变异较快，病理现象复杂，目前的疫苗仅有用于鸡星状病毒的防治。作为猫重要的肠道病毒之一，猫星状病毒常常伴随着猫细小病毒、猫博卡病毒和猫库布病毒等病毒造成混合感染。

由于这四种病毒都主要通过粪口途径传播，混合感染的概率较高，引起的临床症状较为相似，在临床诊断和流行病学调查中往往容易被忽视。现阶段对于猫病毒腹泻的病原检测主要通过临床症状分析、免疫检测及普通PCR等常规手段进行诊断及病原体排查。免疫检测灵敏度低，且存在“窗口期”，感染后3-7天才能检测出相应的抗原或抗体。普通PCR作为传统分子检测技术，虽然耗时短但相比Taqman法灵敏度较差，易出现假阴性情况，并且只能通过核酸凝胶电泳观察结果，步骤相对繁琐。TaqMan法具有灵敏度高和特异性高的特点，可用于定量分析。相比普通PCR可以精确并可视化地检测出腹泻猫粪便和体液中的病毒种类和含量，更方便高效。目前仅有针对猫细小病毒、猫博卡病毒1型和猫星状病毒单个病毒的TaqMan检测技术，而猫库布病毒的TaqMan检测技术未见报道。目前对猫腹泻相关病毒的多重检测仅限于多重普通PCR方法建立的尝试，该方法最低检测限为每份病毒拷贝数10⁵到10⁴，检测灵敏度不甚理想。因此，开发一种检测猫腹泻相关病毒的多重荧光PCR方法是十分有必要的。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测四种猫腹泻相关病毒的多重荧光PCR引物探针组、试剂盒及应用，以解决上述现有技术存在的问题，本发明通过四重荧光PCR反应，一次反应能够覆盖四种病原体检测并将其准确区分，相比于现阶段的免疫检测技术，更加高效精准。