[发明专利]用于鉴定西瓜果皮条纹表型性状的功能性分子标记及其应用

权利要求书

1.用于鉴定西瓜果皮条纹表型性状的功能性分子标记，命名为CAPS-TWMYB-1，其特征在于，所述的功能性分子标记通过使用TWMYB-1正向引物以及TWMYB-1反向引物扩增西瓜基因组DNA后得到，所述的TWMYB-1正向引物以及TWMYB-1反向引物的序列为：

TWMYB-1正向引物：5'-GCATCTATTCTTTTTACCTTCCATT-3'

TWMYB-1反向引物：5'-GCACAGCTTTTAGTTTTGAGAGG-3'。

2.如权利要求1所述的功能性分子标记，其特征在于，所述的西瓜果皮条纹表型性状包括西瓜模糊型条纹表型性状以及西瓜清晰型条纹表型性状。

3.权利要求1或2所述的功能性分子标记在鉴定西瓜果皮条纹表型性状中的应用。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的西瓜果皮条纹表型性状包括西瓜模糊型条纹表型性状以及西瓜清晰型条纹表型性状。

5.一种用于鉴定西瓜果皮条纹表型性状的引物对，其特征在于，所述的引物包括TWMYB-1正向引物以及TWMYB-1反向引物，所述的TWMYB-1正向引物以及TWMYB-1反向引物的序列为：

TWMYB-1正向引物：5'-GCATCTATTCTTTTTACCTTCCATT-3'

TWMYB-1反向引物：5'-GCACAGCTTTTAGTTTTGAGAGG-3'。

6.权利要求5所述的引物对在鉴定西瓜果皮条纹表型性状中的应用。

7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述的西瓜果皮条纹表型性状包括西瓜模糊型条纹表型性状以及西瓜清晰型条纹表型性状。

8.一种鉴定西瓜果皮条纹表型性状的方法，其特征在于，所述的方法包括使用权利要求5所述的引物对扩增西瓜基因组DNA，然后对得到的PCR扩增产物进行Msel限制性内切酶酶切处理的步骤，当酶切产物有274bp条带，则说明该样品为纯合模糊型条纹西瓜品系，当酶切扩增产物有232bp的特征条带，则说明该样品为纯合清晰型条纹西瓜品系，当酶切产物为两条长度分别为274bp、232bp的特征条带，这说明该样品为杂合模糊型条纹西瓜品系。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述的方法包括以下步骤：

S1、取西瓜幼嫩叶片为材料，采用经过改良的CTAB法提取总DNA；

S2、以S1得到的DNA为模板，采用TWMYB-1正向引物和TWMYB-1反向引物进行PCR扩增利用TWMYB-1F和TWMYB-1R进行PCR扩增；

TWMYB-1正向引物：5'-GCATCTATTCTTTTTACCTTCCATT-3'

TWMYB-1反向引物：5'-GCACAGCTTTTAGTTTTGAGAGG-3'

PCR扩增反应体系及反应程序如下：

配置PCR反应体系：2×Taq PCR Mix 4μL；ddH2O 3μL；TWMYB-1F 1μL；TWMYB-1R 1μL；DNA模板1μL；

PCR反应程序：预变性94℃5min，每个循环先95℃变性1min，56℃复性45s，72℃延伸1min；循环35次后，4℃保存，完成PCR的扩增；。

S3、对S2得到的PCR扩增产物进行酶切处理，酶切体系：5μL-PCR产物、0.5μL-Msel限制性内切酶、1μL-10×Buffer Tango、6μL-ddH2O；酶切程序：65℃恒温处理2.5h；

S4、利琼脂糖凝胶电泳进行酶切产物的检测

利用3％浓度的琼脂糖凝胶电泳进行酶切产物的检测，在第一个点样孔中加入DM2000Marker作为分子量标记，其次将酶切产物依次加到点样孔中；设置电压220V，电流150mA，时间25min；电泳结束后，在凝胶成像分析系统下进行检测并保存胶图。