[发明专利]一种烟草羟基香叶基芳樟醇二萜烯醇糖苷的分析方法及二维液相色谱质谱联用系统

说明书

本发明提供一种烟草羟基香叶基芳樟醇二萜烯醇糖苷的分析方法及二维液相色谱质谱联用系统。该方法包括如下步骤：对烟叶进行前处理，采用二维液相色谱质谱联用法对前处理所得待测样品进行定性定量分析：通过第一维液相色谱分离出目标组分，目标组分经补液稀释后进行捕集，再将捕集成分洗脱后由第二维液相色谱进行分离，通过质谱进行定性定量分析。该系统包括第一维液相色谱、补偿泵、连通接口、切换阀、捕集柱、第二维液相色谱、质谱和紫外检测器。本发明灵敏度高、准确性好，实现7种HGL‑DTGs半定量测定。

技术领域

本发明属于烟草化学技术领域，涉及一种烟草羟基香叶基芳樟醇二萜烯醇糖苷的分析方法及二维液相色谱质谱联用系统。

背景技术

羟基香叶基芳樟醇二萜烯醇糖苷(HGL-DTGs)，是烟草茎叶组织中一种丰富的次级代谢产物，通过生长过程中次级代谢途径介导，具有较强的抗虫性。HGL-DTGs结构式如下，由1个17-羟基香叶醇主链构成，在主链的C3和C17位置上分别与葡萄糖、鼠李糖等单元形成2个不同的支链基团(R₁、R₂)，且R₂又配合丙二酰亚胺在C6共同修饰，最终形成多种不同的HGL-DTGs异构体。

由于HGL-DTGs是一组较为复杂的烟草次级代谢产物，且烟草组成复杂、基质效应明显，对其准确测定难度较大。目前仅有HGL-DTGs定性分析方法报道，前处理步骤较为繁琐，涉及多步富集、分离和制备等步骤，尚无烟草HGL-DTGs定量和半定量的分析方法报道。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种烟草羟基香叶基芳樟醇二萜烯醇糖苷的分析方法及二维液相色谱质谱联用系统，灵敏度高、准确性好，实现7种HGL-DTGs半定量测定。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明第一方面提供一种烟草羟基香叶基芳樟醇二萜烯醇糖苷的分析方法，包括如下步骤：对烟叶进行前处理，采用二维液相色谱质谱联用法对前处理所得待测样品进行定性定量分析：通过第一维液相色谱分离出目标组分，目标组分经补液稀释后进行捕集，再将捕集成分洗脱后由第二维液相色谱进行分离，通过质谱进行定性定量分析。

优选地，所述前处理包括如下步骤：

1)将所述烟叶在液氮下粉碎和磨粉；

2)将步骤1)得到的烟叶在有机溶剂中进行振荡，离心后过膜，即得待测样品。

优选地，还包括如下技术特征中的至少一项：

a)所述第一维液相色谱的条件为：第一维液相色谱：反相液相色谱；第一维色谱柱：CAPCELL PAK MGIII C18(50mm×2.0mm，3μm)；流速：0.05～1mL/min；柱温：20～60℃；进样量：1～20.0μL；第一维流动相A相：水+0.05～2％甲酸；第一维流动相B相：甲醇+0.05～2％甲酸；梯度淋洗；

b)所述第二维液相色谱的条件为：第二维液相色谱：反相液相色谱；第二维色谱柱：Agilent ZORBAX 300SB C18(2.1mm×100mm，3.5μm)；流速：0.05～1mL/min；柱温：20～60℃；第二维流动相A相：水+0.05～2％甲酸；第二维流动相B相：乙腈+0.05～2％甲酸；梯度淋洗。

更优选地，特征a)中，所述梯度淋洗的具体程序为：

0～5min，第一维流动相A相：第一维流动相B相体积比为70：30；

5～20min，第一维流动相A相：第一维流动相B相体积比为70：30～5：95；

20～25min，第一维流动相A相：第一维流动相B相体积比为5：95；

25～26min，第一维流动相A相：第一维流动相B相体积比为5：95～70：30；