[发明专利]一种有效去除杂质的噬菌体裂解酶源饲料添加剂制备方法

说明书

本发明涉及饲料添加剂技术领域，且公开了一种有效去除杂质的噬菌体裂解酶源饲料添加剂制备方法，包括以下步骤：S1：制备培养基，把MgSO47H2O、KH2PO4、NaCl、啤酒酵、酵母浸粉、葡萄糖、盐酸硫胺素、木质素粉和麸皮放入混合罐中搅拌混合，得到培养基；S2：制备噬菌体储备液，以制备的培养基为原料，加入氯化钙、氯化镁、香蕉泥、活性炭进行混合，制备噬菌体储备液；S3：制备辅料。本发明通过氯化钙、氯化镁、香蕉泥、活性炭的加入能够使其相互发生反应，在去除异味和杂质的同时能够使其更加有营养，提高培养效率，通过除杂处理能够控制加入原料的杂质，防止其杂质影响培养基的培养和发酵，提高除杂效果。

技术领域

本发明涉及饲料添加剂技术领域，具体为一种有效去除杂质的噬菌体裂解酶源饲料添加剂制备方法。

背景技术

噬菌体是感染细菌的特异性病毒，同时也是地球上数量最多、种类最多的生物实体，据估计生物圈中噬菌体的数量高达1031，由噬菌体侵染裂解导致的细菌死亡率可占总体死亡率的20-40％。因此，噬菌体对生物地球化学循环有相当大的影响。噬菌体的生命史包括裂解周期和溶源周期。进入裂解周期的噬菌体，在侵染宿主后，会利用宿主物质大量合成组装子代噬菌体，并裂解宿主细胞释放子代病毒。

噬菌体在宿主细胞中生长繁殖，能够引起致病菌的裂解，降低致病菌的密度，从而减少或避免致病菌感染或发病的机会，达到治疗和预防疾病的目的，即噬菌体疗法。此疗法已广泛应用于兽医、农业和食品微生物学等领域，国内养殖业尤其是养鸡业常常受到畜禽肠道腹泻病的困扰，此病主要是由大肠杆菌、沙门氏菌等致病微生物引起。随着耐药性细菌的大量出现，用具有专一性强、不易产生抗性等优点的相关噬菌体来治疗细菌疾病受到重视。Smith和Barrow等利用噬菌体疗法可以降低羊羔、仔猪和雏鸡患大肠杆菌肠道疾病的机率，目前的噬菌体裂解酶源饲料添加剂在制备的过程中存在很多杂质，影响整体使用效果，而且成本高，不能满足人们的要求，因此提出一种有效去除杂质的噬菌体裂解酶源饲料添加剂制备方法。

发明内容

(一)解决的技术问题

针对现有技术的不足，本发明提供了一种有效去除杂质的噬菌体裂解酶源饲料添加剂制备方法，解决了目前的噬菌体裂解酶源饲料添加剂在制备的过程中存在很多杂质，影响整体使用效果，而且成本高，不能满足人们的要求的问题。

(二)技术方案

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种有效去除杂质的噬菌体裂解酶源饲料添加剂制备方法，包括以下步骤：

S1：制备培养基，把MgSO47H2O、KH2PO4、NaCl、啤酒酵、酵母浸粉、葡萄糖、盐酸硫胺素、木质素粉和麸皮放入混合罐中搅拌混合，得到培养基；

S2：制备噬菌体储备液，以制备的培养基为原料，加入氯化钙、氯化镁、香蕉泥、活性炭进行混合，并捞去漂浮在上层的漂浮物，制备噬菌体储备液；

S3：制备辅料，先培养噬菌体，噬菌体成产菌种，并对其进行裂解处理，收集裂解液备用，噬菌体储备液经过诱导后在进行灭菌处理，处理后备用，诱导时加入诱导缓冲液进行诱导，诱导缓冲液的加入量为110-180mol/L的Na2HPO4、120-200mmol/L CaCl2和66-150mmol/L MgCl2；

S4：扩培发酵，以噬菌体裂解液和诱导灭菌后的噬菌体储备液为原料，先对菌种进行斜面扩培处理，扩培时加入噬菌体储备液，然后放入茄瓶种子中进行扩培处理，处理后放入种子发酵罐中进行发酵处理，发酵后再次放入发酵罐中二次发酵；

S5：除杂，在进行扩培发酵时每次加入噬菌体裂解液和诱导灭菌后的噬菌体储备液时均要进行过滤除杂处理，并控制加入量；

S6：离心回收，在二次发酵后对其进行离心处理，离心时采用微滤加超滤的纯化浓缩膜过滤，然后收集菌体，收集菌体剩下的离心液回收，回收液当做噬菌体储备液备用；