[发明专利]一种用于单纯疱疹病毒感染性疾病的基因治疗药物

权利要求书

1.一种用于靶向HSV病毒的慢病毒载体，其包装质粒包括表达膜蛋白的质粒pMD.2G、表达含RNA结合蛋白的慢病毒GagPol长链蛋白的质粒、表达野生型慢病毒GagPol长链蛋白的质粒、表达Cas9 mRNA的质粒和表达gRNA的质粒；所述表达gRNA的质粒中，

将gRNA的骨架基因置于慢病毒载体的3’-LTR的区域，由启动子启动表达，对应的慢病毒载体记为VLP-CRISPR；

或将一个gRNA的骨架基因置于慢病毒载体的3’-LTR的区域，另一个gRNA的骨架基因置于5’-LTR和3’-LTR区域之间，由启动非编码短序列RNA的启动子启动表达，对应的慢病毒载体记为VLP-CRISPR-2gRNA。

2.根据权利要求1所述的用于靶向HSV病毒的慢病毒载体，其特征在于，所述gRNA的骨架基因包括序列如SEQ ID NO.9所示的通用型gRNA或序列如SEQ ID NO.10所示的优化型Osp.gRNA。

3.根据权利要求1所述的用于靶向HSV病毒的慢病毒载体，其特征在于，所述表达含RNA结合蛋白的慢病毒GagPol长链蛋白的质粒，是将RNA结合蛋白n个拷贝分别置于慢病毒GagPol长链蛋白N-端或C-端或者同时N-端和C-端；n为RNA结合蛋白所能达到的任意拷贝数。

4.根据权利要求3所述的用于靶向HSV病毒的慢病毒载体，其特征在于，所述RNA结合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

5.根据权利要求1所述的用于靶向HSV病毒的慢病毒载体，其特征在于，所述表达Cas9mRNA的质粒，是将RNA结合蛋白所识别的茎环结构的基因置于Cas9基因的5’-端或/和3’-端；茎环结构数量为所能达到的任意拷贝数；Cas9基因的5’-端或/和3’-端均可以加入1到几个拷贝的核定位信号；所述茎环结构序列如SEQ ID NO.3所示。

6.根据权利要求5所述的用于靶向HSV病毒的慢病毒载体，其特征在于，Cas9包括Sp.Cas9、Sa.Cas9、xCas9、SpG、SpRY、SpCas9-HF1中的任意一种或任意一种的变体。

7.一种用于单纯疱疹病毒感染性疾病的基因治疗药物，其特征在于，利用如权利要求1-6中任一项所述的慢病毒载体递送靶向HSV复制相关基因的gRNA，HSV复制相关的基因包括UL5、UL8、UL9、UL29、UL30、UL42、UL52。

8.根据权利要求7所述的基因治疗药物，其特征在于，将靶向HSV复制相关的基因中任意一个或者两个基因的向导序列分别放到VLP-CRISPR或者VLP-CRISPR-2gRNA中gRNA骨架前端。

9.根据权利要求7所述的基因治疗药物，其特征在于，所述靶向HSV复制相关基因为UL29、UL8，得到慢病毒载体VLP-CRISPR-UL29/UL8。

10.根据权利要求7所述的基因治疗药物，其特征在于，所述靶向HSV复制相关基因为UL52、UL8，得到慢病毒载体VLP-CRISPR-UL52/UL8。