[发明专利]一种猴头菇液体发酵培养基以及制备三萜的方法

说明书

本发明提供一种猴头菇液体发酵培养基以及制备三萜的方法，所述猴头菇液体发酵培养基包括如下质量百分比的组分：葡萄糖2％‑4％，可溶性淀粉1％‑3％，酵母膏0.5％‑1.5％，磷酸二氢钾0.05％‑0.15％，七水硫酸镁0.04％‑0.1％，余量为水。本发明通过对食用菌液体发酵条件的优化，找到使猴头菇生长速度最快的发酵条件。本发明还通过对三萜提取条件的优化，增加猴头菇的次级代谢产物三萜的含量，增加猴头菇的营养价值和经济价值。

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，具体涉及一种猴头菇液体发酵培养基以及制备三萜的方法。

背景技术

猴头菇是猴头菇属，大型药食用真菌。子实体、较大肉质，外形像猴子的头，所以叫“猴头”。猴头菇是中国八大“山珍”之一，“山珍猴头，海味燕窝”，与熊掌、海参和鲨鱼翅并列为四大名菜，肉嫩味香，鲜美可口，营养丰富，色、香、味上乘。另外，猴头菇也是中国传统的贵重中药材，具有滋补健身、助消化、利五脏的功能。现代研究表明，其含有多肽、多糖、脂肪和蛋白质等活性成分，对消化道肿瘤、胃溃疡和十二指肠溃疡、胃炎、腹胀等有一定疗效。猴头菇的经济价值很高，比如猴头菇保健饮料，猴菇饼干，猴菇米稀等。

液体发酵技术是现代生物技术之一，它是指将食药用菌在生育过程中所必需的碳源、氮源、无机盐等一些微量元素以及其它营养物质溶解在纯水中作为培养基，灭菌后接入菌种，通入无菌空气并加以搅拌，提供食用菌菌体呼吸代谢所需要的氧气，并控制适宜的外界条件，进行菌丝大量培养繁殖的过程。工业化大规模的发酵培养即为发酵生产，亦称深层培养或沉没培养。得到的发酵液中含有菌体、被菌体分解及未分解的营养成分、菌体产生的代谢产物。相比于食用菌的固体平板培养，液体发酵有很多优点，比如菌丝体生长迅速，在液体培养中，液体培养基的营养成分分布均匀，有利于菌类营养体的充分接触和吸收。菌丝细胞能在培养基内处于最适温度、pH、氧气和碳氮比的条件下生长，能及时排放呼吸作用产生的代谢废气，因此新陈代谢旺盛，菌丝生长分裂迅速，能在短时间内积累大量的菌丝体和多糖、多肽等具有生理活性的代谢产物；生产周期短，通过食药用菌液体发酵培养获得大量的菌丝体和生理活性物质一般仅需要10天左右的时间，而固体培养需要20-30天。

碳源是猴头菇生长的碳素来源，也是其代谢活动的能源，是产生各种代谢物质的原料。葡萄糖是最主要的碳源，也是最常用的碳源。但是由于葡萄糖效应，葡萄糖量加入过多反而对菌丝生长不利。氮源是猴头菇菌丝体的重要营养组分，也是猴头菇合成蛋白质和核酸所不可缺少的原料。磷酸二氢钾和七水硫酸镁作为无机盐，起着维持培养液渗透压，维持细胞形态的作用。

温度对于猴头菇液体发酵的影响很大，且错综复杂。首先温度影响了猴头菇菌丝球的生长速度，随着温度的上升，由于猴头菇的生长代谢以及繁殖都有酶的参与，所以猴头菇生长繁殖速度加快。根据酶促反应的动力学来看，温度升高，酶促反应增强，呼吸强度增加，导致猴头菇生长速度加快。但是随着温度的升高，酶失活的速度加快，发酵周期缩短，菌体死亡；其次，温度影响猴头菇代谢物的产量；最后，温度影响液体发酵液的物理性质，通过改变发酵液的物理性质间接影响猴头菇的生物合成，也会影响猴头菇对发酵液中营养物质的吸收。

pH对于猴头菇液体发酵的影响也很大，首先pH也影响了猴头菇的酶促反应，强酸强碱容易使猴头菇失活，降低猴头菇的生长速度；其次，pH影响了猴头菇细胞膜的电荷状态，引起细胞膜的渗透性变化，进而影响猴头菇对营养物质的吸收，影响猴头菇的生长速度，也影响了代谢产物的生成；还有，pH也影响猴头菇的形态；最后，pH对猴头菇某些生物合成途径有显著影响。有实验证明，猴头菇在中酸度环境下才能吸收发酵液中的有机成分。

摇床转速可以改变溶氧量，溶氧通过参与到猴头菇液体发酵的生理和生化和过程中来影响菌丝体的生长，转速过小会影响溶氧进而影响菌丝的生长，转速过大则会迫使菌丝成块，结团从而抑制菌丝生长。

三萜类成分是一类基本母核由30个碳原子所组成的萜类化合物，以游离形式或以与糖结合成苷或酯的形式存在，具有多方面的生化活性。三萜也是猴头菇中一类重要活性物质，可以抗癌，抗菌，抗炎，抗病毒，降低胆固醇，对人体好处很多。