[发明专利]一种肠源枯草芽孢杆菌株及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种肠源枯草芽孢杆菌株及其制备方法和应用，肠源枯草芽孢杆菌N29具备较好的抗逆性及抑菌、产酶等益生特性，具备开发为饲用抗生素替代类功能微生态制剂的潜力，为功能微生态制剂的差异化开发提供优良菌株资源。通过高温孵育、胆盐耐受及指示菌的对峙培养方法从健康猪肠道内容物中分离获得1株具有较强的产酶能力和广谱抑菌性能的菌株N29，形态学和16S rDNA分子鉴定确认其为枯草芽孢杆菌。其无菌发酵上清液的抑菌活性成分具备良好的温度、胆盐、pH及人工胃肠液的耐受性，溶血反应小，基本不具备溶血风险，展示了较为良好的生物学特性，为功能微生态制剂的差异化开发及应用提供了良好的菌株资源。

技术领域

本发明涉及枯草芽孢杆菌的技术领域，具体涉及一种肠源枯草芽孢杆菌株及其制备方法和应用。

背景技术

抗生素作为20世纪最重要的发明之一，对治疗人类疾病发挥了历史性的贡献，不仅挽救了数百万人的生命，延长了预期寿命，而且被广泛用作牲畜的生长补充剂，改善动物的整体健康状况，提高产量和质量，在实现畜牧业快速发展方面也做出了巨大贡献。然而，随着养殖业的发展，滥用和过度使用抗生素及其不当处置导致了一系列重大的健康和环境问题。抗生素不仅在肉产品及粪污中残留，影响动物生产及生态环境，还通过食物链传递，威胁人类健康，特别是微生物对抗生素耐药性的兴起与传播，引发全球性健康危机。考虑到其危害，世界各国政府与组织在对饲用抗生素的规范使用进行一些列部署的同时，也一直鼓励抗生素替代品的科学研究与开发。鉴于抗生素的肠道作用特点，新型抗生素的替代品至少应具备以下几个重要特征：1)调整肠道共生物微生物群落结构；2)保证动物肠道结构完整，促进营养物质吸收；3)维护肠道免疫系统稳态，保持动物健康度。这些作用互相关联，并且都与肠道健康直接相关，只要把关键的注意点放到促进动物的肠道健康上，就可以在不牺牲动物生产性能和健康的基础上减少抗生素的使用。

功能型微生态制剂作为替抗产品的典型代表之一，不仅作为“活的”益生菌，竞争占位及生物夺氧等方式抑制肠道内的病原微生物，帮助动物建立有利于宿主的肠道微生态区系。而且其相关功能代谢产物或副生产物，也称为后生元，还能够在动物肠道发挥作用，提高动物的抗病能力，从而促进动物生长，改善生产性能。枯草芽孢杆菌作为我国饲料添加剂目录(2021版)中允许使用的微生物饲料添加剂的一种，其生产要求简单，能形成抗逆性强的芽孢，环境耐受性强，利于保存和运输，而且具备丰富的产酶体系，活性代谢产物丰富。不仅可以产生抗菌活性成分，抑制致病菌在肠道中定植、维持肠道微生物区系平衡，而且分泌多种水解酶，改善消化道内环境、提高饲料利用率，还可以维护动物肠道免疫，增强动物的防病能力，已作为功能微生态制剂广泛应用于畜禽及水产养殖领域。但是不同来源的枯草芽孢杆菌的定植能力、代谢产物功能以及抗逆性差异大，大大限制了其在生产实践中的功能发挥。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的之一在于提供一种肠源枯草芽孢杆菌株，具有耐温、耐胆盐的效果，且具备分泌多种酶和抑菌活性；本发明的目的之二在于提供一种肠源枯草芽孢杆菌株的应用，该菌株能用于制备微生态制剂，能作为高效抗生素替代品；本发明的目的之三在于提供一种肠源枯草芽孢杆菌株的制备方法，从健康猪肠道内容物中定向分离筛选耐温、耐胆盐，且具备分泌多种酶和抑菌活性物质的功能型芽孢杆菌菌株。

本发明的目的之一采用如下技术方案实现：

一种肠源枯草芽孢杆菌株，所述肠源枯草芽孢杆菌株命名为枯草芽孢杆菌N29(Bacillus subtilis N29)，保藏号为GDMCC No:62400，保藏日期为2022年04月20日，保藏分类命名为枯草芽孢杆菌，保藏单位为广东省微生物菌种保藏中心，保藏单位地址为广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。

具体地，所述枯草芽孢杆菌N29的rDNA序列如SEQ ID NO:1所示。

本发明的目的之二采用如下技术方案实现：

上述的肠源枯草芽孢杆菌株的应用，所述肠源枯草芽孢杆菌株用于制备抑制致病菌的微生物态制剂。