[发明专利]一种细胞外囊泡保存方法

说明书

本发明公开了一种细胞外囊泡保存方法。通过向含细胞外囊泡的PBS缓冲液中依次加入2‑甲基咪唑和乙酸锌，并室温静置后所得细胞外囊泡可在室温干燥条件下保存至少7天，该操作方法简单，且需要应用囊泡时易于解离囊泡表面保护层从而得到纯净的囊泡，在细胞外囊泡的体外保存、治疗应用方面具有重要的价值。

技术领域

本发明涉及细胞外囊泡储存技术，具体涉及一种细胞外囊泡保存方法。

背景技术

细胞外囊泡是由细胞释放的具有双层膜结构的囊泡的总称，按直径大小可分为凋亡小体(1-5μm)、微囊泡(0.1-1μm)和外泌体(40-150nm)，其中，在细胞发生凋亡后提取的微囊泡(0.1-1μm)又称作凋亡微囊泡。

细胞外囊泡的内容物包括蛋白质、RNAs等多种生物大分子，且可通过膜受体-受体相互作用、膜融合、内吞、胞饮等方式将内容物传递至其他细胞，因此是细胞间交流沟通的重要方式。近年来的大量研究表明，细胞外囊泡在维持内环境稳态、免疫调节、组织修复和再生、疾病治疗中具有广泛的应用价值。

但是，细胞外囊泡在体外极不稳定，即使冻存于-80度，也难以长时间保证其形态的完整和功能的维持，且不便于运输，这极大地限制了细胞外囊泡的临床应用。

发明内容

针对现有技术的缺陷或不足，本发明提供了2-甲基咪唑和乙酸锌联合在细胞外囊泡室温干燥保存中应用。

进一步，本发明提供了一种细胞外囊泡保存方法。为此，本发明所提供内的保存方法包括：向含有细胞外囊泡的缓冲液中加入2-甲基咪唑和乙酸锌混匀后室温静置，得到可室温保存的细胞外囊泡。

进一步，室温静置后收集沉淀物，对沉淀物室温干燥保存。

进一步，向含有细胞外囊泡的缓冲液中加入含2-甲基咪唑缓冲液和含乙酸锌的缓冲液混匀后室温静置后室温干燥保存。

进一步，向保存后的沉淀物中加入含EDTA的缓冲液，混匀后收集沉淀为被保存细胞外囊泡。

本发明还提供了经上述方法处理后的细胞外囊泡。

经本发明方法处理后的细胞外囊泡稳定性极大提高，可脱离缓冲液，体外长期干燥保存(至少为7天)。进一步，需要纯净的细胞外囊泡时，只需用解离液去除ZIF-8，即可获得形态完整的细胞外囊泡。

附图说明

图1A为实施例1所得的凋亡微囊泡正常形态的扫描电镜(SEM)图，图1B为实施例1中ZIF-8包封凋亡微囊泡后的SEM图；

图2为实施例1空ZIF-8和ZIF-8包封的凋亡微囊泡(凋亡微囊泡@ZIF-8)的X射线衍射(XRD)图；

图3为实施例1ZIF-8包封凋亡微囊泡前后核酸荧光染色图，A为单纯凋亡微囊泡组，B为ZIF-8包封后的凋亡微囊泡组；

图4为实施例1单纯凋亡微囊泡室温干燥保存12h和ZIF-8包封的凋亡微囊泡室温干燥保存12h并解离ZIF-8后的TEM图，A为单纯凋亡微囊泡，B为被ZIF-8包封并于12h后解离ZIF-8的凋亡微囊泡；

图5为实施例1单纯凋亡微囊泡室温干燥保存7天和ZIF-8包封的凋亡微囊泡室温干燥7天并解离ZIF-8的SEM图，A为单纯凋亡微囊泡，B为被ZIF-8包封并于7天后解离ZIF-8的凋亡微囊泡；

图6为对比例处理后的囊泡的SEM图；

图7为实施例2ZIF-8包封凋亡小体后的SEM图；

图8为实施例2单纯凋亡小体室温干燥保存12h与ZIF-8包封的凋亡小体室温干燥保存12h并解离ZIF-8后的SEM图，A为单纯凋亡小体，B为被ZIF-8包封并于12h后解离ZIF-8的凋亡小体；