[发明专利]HEK293细胞裂解液的纯化方法

说明书

本发明涉及一种HEK293细胞裂解液的纯化方法。该HEK293细胞裂解液的纯化方法，由于细胞裂解液中存在大量的细胞碎片、宿主细胞蛋白(HCP)以及宿主细胞DNA等杂质，先经过碟式离心机离心去除大部分细胞碎片后再进行深层过滤，能够极大地减轻深层过滤的压力，避免深层过滤时的滤膜堵塞，大大提高深层过滤的效率，易于扩大生产，并能制备得到浊度较低的澄清液，所得澄清液中的宿主细胞DNA含量和HCP含量都得到了大幅度降低，极大减轻了后续蛋白进一步纯化工艺的压力，降低了生产成本。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种HEK293细胞裂解液的纯化方法。

背景技术

生物制药是以基因工程为基础的现代生物工程，其利用现代生物技术对DNA进行切割、连接、改造，生产出传统制药技术难以获得的生物药品。生物制药技术主要包括细胞工程制药、发酵工程制药和酶工程制药。

细胞工程是应用细胞生物学、遗传学和分析生物学的理论和方法，在细胞水平上对细胞进行大规模培养和分子水平上的基因改造，依据人类的利益和需求进行生产的技术。

细胞工程涉及细胞培养，细胞培养是获得生物药物(例如蛋白或病毒)的主要手段。随着上游技术的不断发展，细胞浓度和存活率都有了显著的改善，这对生物制药下游工艺提出了新的挑战。

过滤和纯化技术是生物制药下游工艺中的主要技术。深层过滤由于其能截留住小尺寸细胞碎片，且较不容易堵塞，具有较大量的去杂能力，最近几年应用越来越广泛。但深层过滤器价格昂贵，用于工业上放大生产时存在困难。

发明内容

基于此，有必要提供一种较低成本、易于放大且高效的HEK293细胞裂解液的纯化方法。

一种HEK293细胞裂解液的纯化方法，包括以下步骤：

获取HEK293细胞裂解液；

对所述细胞裂解液采用碟式离心机进行离心，收集离心上清液；及

将所述离心上清液进行深层过滤处理，得到澄清液。

上述HEK293细胞裂解液的纯化方法，由于细胞裂解液中存在大量的细胞碎片、宿主细胞蛋白(HCP)以及宿主细胞DNA等杂质，先经过碟式离心机离心去除大部分细胞碎片后再进行深层过滤，能够极大地减轻深层过滤的压力，避免深层过滤时的滤膜堵塞，大大提高深层过滤的效率，易于扩大生产，并能制备得到浊度较低的澄清液，所得澄清液中的宿主细胞DNA含量和HCP含量都得到了大幅度降低，极大减轻了后续蛋白进一步纯化工艺的压力，降低了生产成本。

在其中一个实施例中，所述离心的参数包括：进料速度为200L/h～500L/h，转鼓转速为6500RPM～8500RPM，背压为3bar以上，以及操作水压力为3bar以上。

在其中一个实施例中，所述离心的参数包括：进料速度为200L/h～300L/h，转鼓转速为7000RPM～8000RPM，背压为3bar～5bar，以及操作水压力为3bar～6bar。

在其中一个实施例中，所述离心的参数还包括：排渣间隔为1000s～2000s，以及单次排渣时间为20s～40s。

在其中一个实施例中，采用14块～16块深层滤膜进行所述深层过滤处理。

在其中一个实施例中，所述深层过滤处理时间为80min～100min。

在其中一个实施例中，所述细胞裂解液的浊度为900NTU～1500NTU。

在其中一个实施例中，所述离心上清液的浊度为200NTU～350NTU。

在其中一个实施例中，所述细胞裂解液的温度为0℃～20℃。

在其中一个实施例中，所述澄清液的浊度为20NTU～80NTU。