[发明专利]一种反刍专用液态复合微生态制剂及其制备方法

权利要求书

1.一种反刍专用液态复合微生态制剂，其特征在于，包括以下重量百分比的原料：屎肠球菌20％、植物乳杆菌15％、嗜酸乳杆菌15％、枯草芽孢杆菌20％、普利菌-7 15％和酿酒酵母15％。

2.一种反刍专用液态复合微生态制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)准备好制备需要的工具和机械等，再按一定比例称取原料备用；

2)在150ML-250ML的发酵罐中装入50ML-100ML的微生物液体培养基备用；

3)按照一定百分比的接种量在发酵罐中的微生物液体培养基中接入屎肠球菌，植物乳杆菌，嗜酸乳杆菌，枯草芽孢杆菌，普利菌-7和酿酒酵母，再分别放于恒温培养箱中培养一定时间得到一级菌剂；

4)将每个材料制得的一级菌剂按无菌操作分别接入一定量的无菌改良MRS培养基中，并按一定的接种量，在恒温箱内培养一定时间，可得到活菌数为一定量的二级菌剂；

5)将每个材料制得的二级菌剂按无菌操作分别接入一定量的无菌改良MRS培养基中，并按一定的接种量，在恒温箱内培养一定时间，即可得到活菌数为一定量的液态高密度培养液；

6)分别将将屎肠球菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、枯草芽孢杆菌、酿酒酵母和普利菌-7的液态高密度培养液以4︰3︰3︰4︰3︰3比例进行配比，再真空包装即可得到最终菌剂。

3.根据权利要求2所述的一种反刍专用液态复合微生态制剂的制备方法，其特征在于：所述屎肠球菌菌剂的制备方法如下：

①所述屎肠球菌外购，经筛选纯化获得优良纯种菌株；

②一级菌剂——将活化斜面菌种接种于装有50ML无菌改良MRS培养基的锥形瓶中，锥形瓶容积为150ML，放于37℃恒温震荡培养箱中培养24h，转速为50rpm；

③二级菌剂——将一级菌液按无菌操作接入5L无菌改良MRS培养基中，接种量为3％，37℃恒温好氧培养16h，搅拌转速100rpm，活菌数为≧1×10¹⁰CFU/ML；

④发酵罐扩大培养——将二级菌液按无菌操作接入200L无菌改良MRS培养基中，接种量为3％，37℃恒温培养16h，转速为100rpm，活菌数为≧1×10¹⁰CFU/ML；

⑤所述屎肠球菌液态培养的改良MRS培养基为：葡萄糖2％，蛋白胨1％，牛肉膏1％，酵母浸粉0.5％，乙酸钠0.5％，磷酸氢二钾0.2％，柠檬酸氢二铵2％，硫酸镁0.058％，硫酸锰0.025％，碳酸钙1％，吐温80 0.1％，pH值7.0±0.2。

4.根据权利要求2所述的一种反刍专用液态复合微生态制剂的制备方法，其特征在于：所述植物乳杆菌菌剂的制备方法如下：

①所述植物乳杆菌外购，经筛选纯化获得优良纯种菌株；

②一级菌剂——将活化斜面菌种接种于装有50ML无菌改良MRS培养基的锥形瓶中，锥形瓶容积为250ML，放于37℃恒温静止培养24h；

③二级菌剂——将一级菌液按无菌操作接入200ML无菌改良MRS培养基中，接种量为2％，37℃恒温静止培养18h，活菌数为≧1×10⁹CFU/ML；

④发酵罐扩大培养——将二级菌液按无菌操作接入200L无菌改良MRS培养基中，接种量为3％，37℃恒温静止24h，活菌数为≧1×10⁹CFU/ML；

⑤所述植物乳杆菌液态培养的优化MRS培养基为：葡萄糖2％，蛋白胨1％，牛肉膏1％，酵母浸粉0.5％，乙酸钠0.5％，磷酸氢二钾0.2％，柠檬酸氢二铵2％，硫酸镁0.058％，硫酸锰0.025％，吐温80 0.1％，pH值7.0±0.2。