[发明专利]贴合临床现状的老年脓毒症血小板减少小鼠模型构建方法

说明书

贴合临床现状的老年脓毒症血小板减少小鼠模型构建方法，它涉及医疗检测技术领域。它包括以下具体步骤：选取小鼠；饲养；单次尾静脉注射内毒素；对照组尾静脉注射同等体积生理盐水；观察与检测；检测与分析。本发明有益效果为：以20月龄C57BL/6J小鼠为模型制备对象，采用内毒素尾静脉注射方法，构建贴合临床现状的老年脓毒症血小板减少小鼠模型构建方法老年脓毒症血小板减少小鼠模型，为脓毒症血小板减少的发病机制及药物治疗研究提供更加贴合临床实际的脓毒症血小板减少模型，老年小鼠造模在机体年龄和各项机能方面更加接近临床脓毒症患者的年龄特点，使用静脉注射内毒素，干扰因素少，模型稳定性强。

技术领域

本发明涉及医疗检测技术领域，具体涉及贴合临床现状的老年脓毒症血小板减少小鼠模型构建方法。

背景技术

为更好的研究脓毒症的发病机制及寻找预防治疗方法，研究人员已有多种构建脓毒症模型的方法，如：盲肠结扎穿孔法、自身排泄物腹腔移植法、细菌攻击法(腹腔、静脉或气管肺部注射)和内毒素攻击法(腹腔、静脉注射)等，以期复制模拟临床脓毒症患者的发病过程。其中盲肠结扎穿孔法制备的脓毒症模型在众多模型中认可度较高，但该方法在构建过程中存在较多影响因素，盲肠结扎位置、穿孔大小、力度等均存在不可控因素，因此，模型的稳定性和可重复性较差。且目前的动物模型制备多采用低龄动物，特别是用啮齿类低龄大鼠、小鼠制备脓毒症模型，所制备鼠类脓毒症模型自愈能力较强，无法贴合临床实际。此外，目前所制备的脓毒症模型较少涉及脓毒症血小板减少情况的模拟。因此，需要构建更加贴合临床实际的动物模型，来复现脓毒症血小板减少的临床特征及发病过程。

C57BL/6J是目前应用最广泛的近交系小鼠和首个完成全基因组测序的小鼠，小鼠与人类寿命对比研究显示18-24月龄小鼠相当于人类56-69岁，且目前老年C57BL/6J小鼠已应用于免疫学、癌症、长寿干预和生物标志物等相关研究中。

现有技术中，所用造模小鼠均为年轻健康小鼠，本身对内毒素等造模诱导因素抵抗力强，自愈能力强，不能很好的模拟脓毒症的发病过程，且盲肠结扎穿孔术干扰因素较多，模型制备稳定性和可重复性较差。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术中不足与缺陷，提供贴合临床现状的老年脓毒症血小板减少小鼠模型构建方法，以20月龄C57BL/6J小鼠为模型制备对象，采用内毒素尾静脉注射方法，构建一种老年脓毒症血小板减少小鼠模型，为脓毒症血小板减少的发病机制及药物治疗研究提供更加贴合临床实际的脓毒症血小板减少模型，老年小鼠造模在机体年龄和各项机能方面更加接近临床脓毒症患者的年龄特点，使用静脉注射内毒素，干扰因素少，模型稳定性强。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案是：贴合临床现状的老年脓毒症血小板减少小鼠模型构建方法，它包括以下具体步骤：选取小鼠：采用20月龄C57BL/6J小鼠，体重30～35g；饲养：所述在选取完后应当适应性饲养1周；单次尾静脉注射内毒素：称量小鼠体重，按15mg/kg剂量给予模型组小鼠尾静脉注射内毒素，对照组小鼠按体重注射等体积生理盐水；对照组尾静脉注射生理盐水：生理盐水注射量应当与内毒素注射量相等；观察与检测：注射前、注射12h、24h、48h和72h目内眦取血检测小鼠血小板减少计数评估血小板减少情况，连续72h观察小鼠生存状态(小鼠毛发是否光泽，活动量是否正常，对外界刺激的反应速度，饮食饮水、排便情况，眼部有无充血、粘连、溃烂等情况，小鼠的死亡情况)，72h后取血分离血清，处理小鼠后分离小鼠肺脏组织，生理盐水冲洗干净并放入4％多聚甲醛固定保存；检测与分析：检测小鼠外周血血小板计数，酶联免疫吸附法检测血清中TNF-α、IL-1β和IL-18炎症因子表达，肺脏组织病理分析观察肺脏损伤情况，免疫组织化学法观察肺组织中血小板的扣押情况。

采用上述技术方案后，本发明有益效果为：以20月龄C57BL/6J小鼠为模型制备对象，采用内毒素尾静脉注射方法，构建一种老年脓毒症血小板减少小鼠模型，为脓毒症血小板减少的发病机制及药物治疗研究提供更加贴合临床实际的脓毒症血小板减少模型，老年小鼠造模在机体年龄和各项机能方面更加接近临床脓毒症患者的年龄特点，使用静脉注射内毒素，干扰因素少，模型稳定性强。