[发明专利]2,2′-氧代双-1,4-二叔丁苯的制备及应用

说明书

本发明提供了一种2,2'‑氧代双‑1,4‑二叔丁苯的制备及应用。所述2,2'‑氧代双‑1,4‑二叔丁苯的制备方法是通过从海洋微小原甲藻(Prorocenturm minimum)中提取获得2,2'‑氧代双‑1,4‑二叔丁苯。所述2,2'‑氧代双‑1,4‑二叔丁苯可以应用于抑制革兰氏阴性病原菌分泌毒性蛋白。

技术领域

本发明涉及生物制药技术领域，特别涉及2,2′-氧代双-1,4-二叔丁苯的制备及应用。

背景技术

细菌耐药性的上升，新抗生素发现数量的下降，以及耐药细菌的进化和耐药基因的水平转移，造成了全球性公共卫生危机。尽管近期抗生素研究的活力被重新激发，但大多数新抗生素的作用机制与传统抗生素相似。因此，迫切需要开发具有不同作用机制的新型抗生素。而寻找不影响病原菌生长、却能有效降低其致病性，即抗毒力药物，其引起耐药的可能性比杀菌剂低，是当前抗菌药物研究的前沿。目前认为革兰氏阴性致病菌在长期进化过程中形成入侵宿主细胞的特异性分泌系统共有5种类型，其中最显著的是Ⅲ型分泌系统(T3SS)，其分泌的毒性蛋白是许多革兰氏阴性病原菌最重要的毒力因子。T3SS抑制剂不影响致病菌的生存，比传统抗菌药物在耐药性方面具有很大的优势。

因此，找出针对特定细菌起效的T3SS抑制剂，以及如何稳定、低成本获得该T3SS抑制剂便成为当今广受学者们关注的课题。

发明内容

本发明目的在于提供一种2,2′-氧代双-1,4-二叔丁苯的制备及应用，以解决现有技术中所存在的一个或多个技术问题，提供至少一种有益的选择或创造条件。

本发明的第一方面在于提供了一种通过生物合成并提取2,2′-氧代双-1,4-二叔丁苯的方法。具体是通过从海洋微小原甲藻(Prorocenturm minimum)中提取获得2,2′-氧代双-1,4-二叔丁苯。

进一步，具体步骤包括：

扩大培养海洋微小原甲藻：无菌操作将藻液5mL接入装有培养基的锥形瓶中，于20℃静置培养11天，每天12小时光照，12小时黑暗。

提取：将培养所得海洋微小原甲藻利用高速离心机离心后，再经10μm滤膜过滤，分别得到藻细胞。将藻细胞用乙酸乙酯浸泡，浸泡液在低于50℃下减压浓缩乙酸乙酯粗提物，将乙酸乙酯粗提物经硅胶柱层析进行分离，收集10％～50％乙酸乙酯/石油醚洗脱液，依照收集顺序等分成10组分。

分离：取其中第3组分采用硅胶柱层析进行纯化，用体积比为1:100的甲醇-二氯甲烷为洗脱剂进行洗脱得到2,2′-氧代双-1,4-二叔丁苯。

分离所得化合物是2,2′-氧代双-1,4-二叔丁苯[2,2′-oxybis(1,4-ditert-butylbenzene)]，其分子式为C₂₈H₄₂O，分子量为394.32，结构式如下：

以往获取2,2′-氧代双-1,4-二叔丁苯的方法是通过固相光解方法合成。而上述制备方法提供了一种全新的制备方法，其成本较低，能够大规模应用于工业生产之中。

本发明的第二方面在于提供2,2′-氧代双-1,4-二叔丁苯在抑制革兰氏阴性病原菌分泌毒性蛋白中的应用。

进一步，所述应用中提及的革兰氏阴性病原菌包括副溶血弧菌。

进一步，所述应用中提及的毒性蛋白是通过Ⅲ型分泌系统表达。

进一步，所述Ⅲ型分泌系统包括转运蛋白基因VopD1和/或效应蛋白基因VopS。

本发明所述的2,2′-氧代双-1,4-二叔丁苯在50～100μM浓度下，能显著抑制海洋病原副溶血弧菌的转运蛋白基因VopD1和效应蛋白基因VopS的表达。同时，对海洋病原副溶血弧菌的生长没有影响，毒性极小。