[发明专利]一种含角蛋白酶突变体和胆汁酸的饲料添加剂及其应用在审
申请号: | 202210745703.1 | 申请日: | 2022-06-29 |
公开(公告)号: | CN115074347A | 公开(公告)日: | 2022-09-20 |
发明(设计)人: | 娄倩倩;曹爱智;张西雷;徐志敏 | 申请(专利权)人: | 山东龙昌动物保健品有限公司 |
主分类号: | C12N9/54 | 分类号: | C12N9/54;C12N15/75;C12N1/21;A61K38/48;A61P3/00;A61P1/12;A23K20/105;A23K20/189;C12R1/125;A61K31/575 |
代理公司: | 青岛合创知识产权代理事务所(普通合伙) 37264 | 代理人: | 王晓晓 |
地址: | 251100 山东省*** | 国省代码: | 山东;37 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 角蛋白 突变体 胆汁 饲料添加剂 及其 应用 | ||
本发明提供了一种含角蛋白酶突变体和胆汁酸的饲料添加剂及其应用。本发明使用饱和突变方法对
技术领域
本发明属于饲料添加剂领域,具体涉及一种含角蛋白酶突变体和胆汁酸的饲料添加剂及其应用。
背景技术
角蛋白酶是一种能够降解角蛋白类底物(例如角质,皮屑,羽毛等)的特异性角蛋白酶,由真菌、放线菌和细菌等多种微生物以角蛋白为单一碳源生长时产生。角蛋白酶作为一种底物专一性较宽泛,水解催化能力强的蛋白酶,广泛地运用于日化行业、畜牧行业、饲料行业、制革行业、医药行业中,具有巨大的研究与应用价值。角蛋白中其粗蛋白含量在80%以上,各种氨基酸总量在70%以上,动物必需氨基酸种类齐全,同时含有较多大量元素、微量元素和未知生长因子,是一种良好的、可替代或部分替代鱼粉的饲料蛋白以及肥料来源,对它的开发利用具有重要的应用前景。目前,野生角蛋白酶大多属于高温碱性蛋白酶,其最适反应温度一般为60℃左右,在20℃-40℃条件下的酶活或者催化活性一般不高。
易错PCR技术是采用DNA聚合酶在进行PCR反应扩增目的片段的同时,通过调整反应条件,增加基因突变频率,从而以一定的频率向目的基因中随机引入突变,构建突变体文库,再通过高通量方式筛选需要的正向突变体。易错PCR技术是蛋白质分子改造中的重要手段。
发明内容
本发明提供了一种含角蛋白酶突变体和胆汁酸的饲料添加剂及其应用。本发明通过随机突变筛选得到几种在低温条件下酶活提高的突变体:KS01、KS02、KS03、KS04,并将其与胆汁酸混合制成饲料添加剂,有效的降低禽畜动物的腹泻情况,提高其肠道功能。
为了实现上述发明目的,本发明采用以下技术方案予以实现:
本发明提供了一种角蛋白酶突变体,所述角蛋白酶突变体的氨基酸序列具有如下之一所述的氨基酸序列:
(1)如SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列;
(2)如SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列;
(3)如SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列;
(4)如SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列。
进一步的,所述角蛋白酶突变体具体为由氨基酸序列为SEQ ID NO:1的角蛋白酶的第340位的丝氨酸变为缬氨酸获得的角蛋白酶突变体KS01;由氨基酸序列为SEQ ID NO:1的角蛋白酶的第340位丝氨酸变为谷氨酸获得的角蛋白酶突变体KS02;由氨基酸序列为SEQID NO:1的角蛋白酶的第340位的丝氨酸变为亮氨酸获得的角蛋白酶突变体KS03;由氨基酸序列为SEQ ID NO:1的角蛋白酶的第340位的丝氨酸变为苯丙氨酸获得的角蛋白酶突变体KS04。
本发明还提供了所述的角蛋白酶突变体的编码基因,所述编码基因具有如下之一所述的核苷酸序列:
(1)如SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列;
(2)如SEQ ID NO:6所示的核苷酸序列;
(3)如SEQ ID NO:8所示的核苷酸序列;
(4)如SEQ ID NO:10所示的核苷酸序列。
本发明还提供了包含所述的角蛋白酶突变体的编码基因的重组表达载体。
本发明还提供了包含所述的角蛋白酶突变体的编码基因的重组工程菌。
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