[发明专利]一种血浆lncRNA检测试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种血浆lncRNA检测试剂盒及其应用。lncRNA的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示。通过RNA‑seq筛选获得糖尿病肾病肾组织中差异表达的lncRNA(ENST00000436340.2)标记物，通过功能实验证实lncRNA调控肾脏固有细胞足细胞损伤。用于检测临床血浆样本，结果显示糖尿病肾病患者血浆中lncRNA相对表达量显著高于健康对照组人群。

技术领域

本发明涉及生物医学技术技术领域，更具体的说是涉及一种血浆lncRNA 检测试剂盒及其应用。

背景技术

近年来，全球糖尿病患病率急剧上升，成为危害人类健康的一个公共卫生问题，糖尿病肾病(diabetic kidney disease,DKD)是糖尿病最常见的并发症之一，是导致终末期肾脏病(end stage renal disease,ESRD)的主要原因，约占终末期肾衰竭的40％。糖尿病所导致的肾脏损害几乎可累及包括肾小球、肾小管和肾间质在内的所有的肾脏结构，并且其进展速度之快远远高于非糖尿病肾病患者。足细胞是位于肾小球基底膜外侧的终末分化的上皮细胞，是构成肾小球滤过屏障的关键部分，足细胞损伤是DKD发生发展的关键起始事件，在DKD早期即可观测到足细胞结构和功能的改变。早期准确诊断是DKD 治疗及延缓肾脏病变进程的重中之重。DKD诊断以及肾脏病变评估的金标准是肾活检穿刺，存在有创、费用高、技术要求高等局限性，临床工作中亟需一个简单易行、稳定可靠的鉴别方法。

长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是一类转录本长度超过 200个核苷酸的RNA分子的总称，其缺乏编码蛋白的能力，在基因表达、细胞功能、疾病的发生发展等方面发挥重要作用。近年来，随着微阵列芯片及高通量测序等技术的快速发展，lncRNA的生物学特点及功能逐渐被认识，越来越多的证据表明lncRNA的异常表达与肾脏疾病，尤其是糖尿病肾病的发生与发展密切相关。血清血浆中的LncRNAs性质稳定、含量丰富、易于定量检测，且存在显著的疾病特异性，可以作为疾病的生物标志物。临床上尚缺乏用于 DKD辅助诊断的较为稳定的生物标志物的报道。

因此，拓宽该领域研究，筛选DKD特异或异常表达的血清血浆LncRNAs 作为生物标志物，以提高DKD诊断的灵敏性和预后判断的准确性，明确其在DKD患者中的临床价值，为糖尿病肾病的临床治疗提供新的策略是本领域技术人员亟需解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种血浆lncRNA检测试剂盒及其应用。筛选获得糖尿病肾病肾组织中差异表达的lncRNA，发现ENST00000436340.2在糖尿病肾病肾组织中表达明显增高，主要分布于肾小球足细胞，功能实验显示 ENST00000436340.2调控足细胞损伤及骨架重排。同时ENST00000436340.2 在糖尿病肾病患者的血浆中表达明显上调，且其表达水平与蛋白尿水平相关。本发明发现的ENST00000436340.2作为全新的lncRNA分子标记物在糖尿病肾病患者疾病进展的预测、评估方面具有一定的应用前景。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种检测lncRNA表达量的试剂在制备用于诊断和/或评估糖尿病肾病的试剂盒中的应用；lncRNA的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

优选的：检测lncRNA表达量的试剂包括扩增所述lncRNA的核苷酸序列的引物，扩增所述lncRNA的核苷酸序列的引物：ENST00000436340.2F核苷酸序列如SEQ ID No.2所示和ENST00000436340.2 R如SEQ ID No.3所示。

优选的：表达量为基于lncRNA参比内参基因的相对表达量。

优选的：内参基因为β-actin基因。