[发明专利]一种脑小血管病小鼠模型的构建方法

说明书

本发明提供一种脑小血管病模型的构建方法，通过在平滑肌组织中特异性地降低MYPT1的表达以构建模型。通过以下方法验证：(1)测量MYPT1平滑肌条件性敲除小鼠的动脉血压；(2)利用病理染色观察不同月龄小鼠的血管病变；(3)9.4T磁共振观察小鼠的影像学改变；(4病理染色和电镜观察小鼠的髓鞘损伤情况；(5)免疫荧光染色评估胼胝体区域小胶质细胞和星形胶质细胞的活化情况，qPCR检测小鼠脑内炎性因子的表达情况；(6)采用Y迷宫及新物体识别实验检测小鼠的执行功能、旷场实验及高架十字迷宫检测小鼠的焦虑情绪、水迷宫实验检测小鼠的空间记忆能力。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种脑小血管病小鼠模型的构建方法。

背景技术

脑小血管病(cerebral small vessel disease，CSVD)，是一组主要累及脑内小血管的疾病，包括脑小动脉、分支小动脉、毛细血管和小静脉等。CSVD发病率高，临床症状隐匿且病程进展缓慢。主要的临床表现为焦虑样情绪表现与认知功能减退(主要是执行功能)。关于CSVD的病理生理机制目前缺乏深入的研究，同时也缺乏有效的治疗方法，其中很大一部分原因在于没有理想的CSVD动物模型。

目前的CSVD模型都存在明显的缺陷，双侧颈动脉梗阻/狭窄(bilateral carotidartery occlusion，BCAO/bilateral carotid artery stenosis，BCAS)都主要是累及大血管、缺乏危险因素、没有时间依赖性。目前用的最多的自发性高血压大鼠(Spontaneouslyhypertensive rats)模型在9个月后容易出现自发脑出血或脑梗，并且其血压不稳定、有多动症、成本高。另外，NOTCH3转基因鼠(模拟CADASIL)与HTRA1转基因鼠(模拟CARASIL)都是模拟遗传性的脑小血管病，并且都没有危险因素。基于此，构建新的CSVD模型对于脑小血管病的研究具有重要意义。

发明内容

本发明针对现有技术中的不足，提供一种脑小血管病模型的构建方法，通过基因编辑技术特异性敲低平滑肌MYPT1，发现小鼠除了呈现出高血压表现外，还能够表现出于人类类似的CSVD的临床表现，主要是呈现出年龄依赖性的血管病变，影像学改变、分子病理改变及行为学该改变。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种脑小血管病模型的构建方法，通过在平滑肌组织中特异性地降低MYPT1的表达以构建模型。

进一步地，主要通过以下技术方法验证：

(1)测量MYPT1平滑肌条件性敲除小鼠的动脉血压；

(2)利用病理染色观察不同月龄小鼠的血管病变；

(3)9.4T磁共振观察小鼠的影像学改变；

(4)病理染色和电镜观察小鼠的髓鞘损伤情况，qPCR检测小鼠脑内炎性因子的表达情况；

(5)免疫荧光染色评估胼胝体区域小胶质细胞和星形胶质细胞的活化情况；

(6)采用Y迷宫及新物体识别实验检测小鼠的执行功能(工作记忆)、旷场实验及高架十字迷宫检测小鼠的焦虑情绪、水迷宫实验检测小鼠的空间记忆能力。

本发明的有益效果是：本发明通过在平滑肌组织中特异性地降低MYPT1的表达提供了一种构建脑小血管病模型的方法，相对于现有的CSVD动物模型而言，通过该方法构建的动物模型具有CSVD的危险因素，包括高血压和年龄依赖性等；此外，构建的小鼠模型的血管病变跟CSVD类似，主要累及脑小血管，并且临床表现十分稳定。

附图说明

图1是不同月龄的MYPT1平滑肌条件性敲除小鼠与同窝对照小鼠的平均动脉压值，其中：

A：1-3月龄MYPT1基因敲除鼠与对照小鼠的收缩压，