[发明专利]一种CYP2C19基因多态性的检测试剂盒及检测方法

说明书

本发明公开了一种CYP2C19基因多态性的检测试剂盒及检测方法。所述试剂盒含有检测用引物和检测用探针，所述检测用引物和检测用探针包括：CYP2C19*2引物及CYP2C19*2探针，CYP2C19*3引物及CYP2C19*3探针，CYP2C19*17引物及CYP2C19*17探针。所述试剂盒具有快速，无污染，检测简便等优点，适用于CYP2C19*2*3*17单个核苷酸突变位点检测，可应用于患者氯吡格雷临床用药指导。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种CYP2C19基因多态性的检测试剂盒及检测方法。

背景技术

氯吡格雷是一种前体的血小板受体抑制药物，需要经过P450代谢酶的转变为活性物质才能有效。而2C19 更是主要的酶，因此它与抵抗密切相关。

P450 2C19 是在人的第10 号染色体，编码蛋白酶包括9个外显子和5个内含子，它们位于肝微粒体内。在CYP2C19的基因编码中，10号染色体长臂上编码的外显子5单核苷酸681GA的剪接变异将导致使其失活。目前文献报道CYP2C19酶基因型有很多变异，可变异为酶的转化作用增强和减弱的突变，其中表达酶活性增强的仅是CYP2C19*17，不携带任何类型变异的称为野生型。而这些会导致氯吡格雷生成有作用物质的速度发生改变。其中主要突变位点分为CYP2C19* 2 和CYP2C19* 3。研究证实含有* 3 与亚洲人群氯吡格雷抵抗密切相关。

CYP2C19基因的突变虽然只能解释12％的氯吡格雷抵抗存在，但它影响其药物转为有效物质的多个步骤。根据人口种族和遗传背景不同，常见的CYP2C19单核苷酸遗传变异率达30％至55％不等，从而影响个体对氯吡格雷吸收后转变为有效物质的量、速度和时间。而亚洲人中高达15％。故检测其意义重大。与大量研究血小板高反应的增加和缺血事件的发生，如支架内再狭窄等的关系相比，我们关于增强氯吡格雷反应和出血事件发生关系的认识却存在着空缺。功能增强型基因变异CYP2C19*17在白种人患者中相当普遍，它通过快速转化氯吡格雷而增强其抑制血小板反应。因此，它可以提高预防MACE事件的发生，但是也增加了出血风险，尤其是CYP2C19纯合子*17/*17基因突变患者。这个结果在PLATO遗传亚研究中被证实。CYP2C19*2和*17基因变异是普遍存在的，携带*2基因变异患者较无携带者在双联抗血小板药物治疗上表现高血小板聚集率，而对于含有*17基因变异患者较无变异者血小板聚集率无区别。总之，氯吡格雷抵抗及临床不良事件的出现和大量的遗传作用有关。

目前临床或实验室检测CYP2C19基因多态性的方法很多，包括测序法、基因芯片法和荧光定量PCR法等。但各种检测方法均是针对单一的单核苷酸多态性位点(SNP)进行检测的，检测时间较长且检测成本较高，但上述三个突变位点的突变频率较高，单独检测不仅耗时费力且准确率低，难以在短时间内给出位点的定性结论。因而无法实时准确地给予被测者准确的代谢疗效预测和用药指导。因此，研发一款对CYP2C19基因CYP2C19*2、CYP2C19*3和CYP2C19*17这3个位点的多态性进行检测的试剂盒及检测方法，是十分重要的。

发明内容

本发明的目的是针对目前CYP2C19*2*3*17诊断技术的临床需求及缺陷，而提供一种基于Taqman荧光定量PCR技术的，具有快速、简便、高效的CYP2C19基因多态性的检测试剂盒及检测方法。

为了实现上述目的，本发明采取如下技术方案：

本发明首先提供了一种CYP2C19基因多态性检测试剂盒，所述试剂盒含有检测用引物和检测用探针，所述检测用引物和检测用探针包括：CYP2C19*2引物及CYP2C19*2探针，CYP2C19*3引物及CYP2C19*3探针，CYP2C19*17引物及CYP2C19*17探针；所述检测用引物以及检测用荧光探针的核苷酸序列如下：

CYP2C19*2引物：

*2F：5’-CTGTGATCCCACTTTCATCCT-3’，

*2R：5’-TGTAAGTGGTTTCTCAGGAAGC-3’；