[发明专利]一种用于检测鼠鼻罗氏菌的特异性引物、探针及其应用

说明书

本发明公开了一种用于检测鼠鼻罗氏菌的特异性引物、探针及其应用，所述的上游引物和下游引物的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示，探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。所述的特异性探针和引物应用于制备检测鼠鼻罗氏菌试剂盒，实现对鼠鼻罗氏菌的特异性检测。本发明首次提供了用于检测鼠鼻罗氏菌的特异性引物、探针，用于试剂盒的制备和鼠鼻罗氏菌的检测，在10²copise/μL至10⁷copise/μL的区间内，线性关系都比较好，检测方法简单、特异性高。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种用于检测鼠鼻罗氏菌的特异性引物、探针及其应用。

背景技术

罗氏菌属（Rothia）是革兰氏阳性菌，兼性厌氧，不形成孢子，无动力的细菌。目前，该菌属包含六个种，分别为Rothia aeria，Rothia amarae，Rothia dentocariosa，Rothiamucilaginosa，Rothia nasimurium和Rothia terrae。其中鼠鼻罗氏菌（R. nasimurium）是在2000年首次被报道且分离自健康的鼻腔。

近年来随着抗生素的滥用现象日益严重，细菌耐药性问题已成为科学研究的热点，多重耐药菌的日益增多，特别是“超级细菌”的出现，增加了治疗难度和医疗成本，更使人类面临的无药可救的尴尬局面。鼠鼻罗氏菌一直以来被认为是存在于人、禽类和鼠上呼吸道和肠道的共生菌群，呈严重的泛耐药，常与金黄色葡萄球菌协同感染。鼠鼻罗氏菌的多重耐药性和协同感染性，说明该菌具有传播风险，影响公共健康，需要引起重视。但目前检测鼠鼻罗氏菌方法相对复杂，缺乏相对应的引物、探针及试剂盒，亟待进一步解决。

发明内容

针对现有技术中鼠鼻罗氏菌检测方法复杂，缺乏相对应的引物、探针及试剂盒的问题，本发明提供了一种用于检测鼠鼻罗氏菌的特异性引物、探针及其应用，用于检测鼠鼻罗氏菌，特异性高，方法简单。

本发明通过以下技术方案实现：

一种用于检测鼠鼻罗氏菌的特异性引物、探针，上游引物和下游引物的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示，探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

进一步地，所述探针的5’端标记荧光基团，3’端标记猝灭基团。

进一步地，所述的荧光基团为FAM，所述的猝灭基团为BHQ1。

本发明中，所述的特异性引物、探针在制备检测鼠鼻罗氏菌试剂盒中的应用。

本发明中，所述的特异性引物、探针在检测鼠鼻罗氏菌中的应用。

进一步地，检测鼠鼻罗氏菌中PCR扩增反应体系为20μL，包括Premix Ex Taq^TM 10μL，上游引物0.2μM、1μL，下游引物0.2μM、1μL，探针0.1μM、0.5μL，模板5μL，ddH₂O补足。

进一步地，检测鼠鼻罗氏菌中PCR扩增反应程序为95℃ 600s，95℃ 15s，60℃60s，40个循环。

有益效果

本发明首次提供了用于检测鼠鼻罗氏菌的特异性引物、探针，可用于试剂盒的制备和鼠鼻罗氏菌的检测，在10²copise/μL至10⁷copise/μL的区间内，线性关系都比较好，检测方法简单、特异性高。

附图说明

图1为鼠鼻罗氏菌的荧光定量PCR方法扩增曲线；

图2为鼠鼻罗氏菌的荧光定量PCR标准曲线。

具体实施方式