[发明专利]一种用于检测HPV的液相杂交捕获探针、应用及其试剂盒

权利要求书

1.一组用于检测HPV的探针，其特征在于，所述探针包括：(1)与另一探针互补配对的探针结合序列，以及(2)与HPV病原体序列互补配对的靶特异性序列。

2.根据权利要求1所述的探针，其特征在于，所述探针结合序列包括第一探针结合序列和第二探针结合序列。

3.根据权利要求2所述的探针，其特征在于，所述探针的5’端具有与另一探针的3’端互补配对的第一探针结合序列，并且所述探针的3’端具有与另一探针的5’端部互补配对的第二探针结合序列。

4.根据权利要求1所述的探针，其特征在于，所述靶特异性序列的长度为20-80nt。

5.根据权利要求1所述的探针，其特征在于，所述探针结合序列的长度为8-30nt。

6.根据权利要求3所述的探针，其特征在于，所述探针5’端与另一探针互补配对的第一探针结合序列长度为8-30nt，所述探针3’端与另一探针互补配对的第二探针结合序列长度为8-30nt。

7.根据权利要求1所述的探针，其特征在于，所述探针的3’端或5’端带有生物标记物。

8.根据权利要求7所述的探针，其特征在于，所述生物标记物为生物素。

9.根据权利要求1-8的探针在制备用于HPV检测试剂中的应用，其特征在于，所述探针可以透过杂交捕获的方式进行检测。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述杂交捕获包括如下步骤：

(1)杂交捕获

i.配置杂交体系：所述杂交体系包含所述探针；

ii.杂交反应：将所述杂交体系置于55～65℃进行杂交1～2小时；

(2)产物捕获：杂交反应结束后，反应体系中加入链霉亲和素磁珠进行杂交捕获；

(3)产物洗脱：捕获结束后，使用洗脱缓冲液I、洗脱缓冲液II

以及洗脱缓冲液III各洗涤1次；

(4)产物扩增纯化：洗涤结束后，加入PCR反应体系，进行PCR扩增程序，反应结束后，使用磁珠进行纯化。

11.根据权利要求10所述的应用，其特征在于，所述杂交体系中包含2-10fmol的探针、1×Hyb Buffer、1×Enhance、1μg Human Cot-1，以及100pmmol的Blocker。

12.根据权利要求10所述的应用，其特征在于，所述杂交反应的条件为95℃变性2分钟、60℃杂交1小时。

13.根据权利要求10所述的应用，其特征在于，所述产物捕获的条件为60℃捕获20分钟。

14.根据权利要求10所述的应用，其特征在于，所述洗脱缓冲液I的配方为5×SSPE、0.5％～5％SDS；所述洗脱缓冲液II的配方为2×SSPE、0.05％～0.5％SDS；所述洗脱缓冲液III的配方为0.1×SSPE、0.005％～0.05％SDS。

15.一种用于检测HPV的杂交捕获试剂盒，其特征在于，包括如下组分：探针、杂交反应液、洗脱缓冲液、链霉亲和素磁珠、核酸纯化磁珠；所述探针包括与另一探针互补配对的探针结合序列以及与HPV病原体序列互补配对的靶特异性序列。

16.根据权利要求14所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括末端修复酶混合物、末端修复反应缓冲液、含分子标签的接头、文库扩增引物、PCR预混液、接头封闭剂、DNA封闭剂、杂交增强剂、磁珠洗涤液、捕获文库PCR引物。