[发明专利]一种基于MLPA技术对中药材麦冬与山麦冬进行鉴别的方法

权利要求书

1.一种基于多重连接探针扩增技术对中药材麦冬与山麦冬进行鉴别的方法，其特征在于包括以下步骤：

1)提取样品基因组DNA；

2)以提取的基因组DNA为模板，利用特异性引物扩增麦冬与山麦冬的叶绿体基因片段并纯化扩增产物；

3)将MLPA探针与纯化产物进行杂交；

4)利用DNA连接酶将步骤3)的杂交产物进行连接；

5)利用通用引物对步骤4)的连接产物进行qPCR扩增；

6)收集熔解曲线信号，观测Tm值，

其中，所述MLPA探针共3条，由两条左探针和一条右探针组成，探针序列如下：

麦冬左探针：如SEQ ID NO:1所示的序列；

山麦冬左探针：如SEQ ID NO:2所示的序列；

共同右探针：如SEQ ID NO:3所示的序列。

2.如权利要求1所述对中药材麦冬与山麦冬进行鉴别的方法，其特征在于，所述麦冬与山麦冬的叶绿体基因片段的核苷酸序列分别如SEQ ID NO:8、9所示。

3.如权利要求2所述对中药材麦冬与山麦冬进行鉴别的方法，其特征在于，用于扩增所述叶绿体基因片段的特异性引物序列如下；

上游引物:如SEQ ID NO:4所示的序列；

下游引物:如SEQ ID NO:5所示的序列。

4.如权利要求1所述对中药材麦冬与山麦冬进行鉴别的方法，其特征在于，所述通用引物序列如下：

Primer F:如SEQ ID NO:6所示的序列；

Primer R:如SEQ ID NO:7所示的序列。

5.如权利要求1所述对中药材麦冬与山麦冬进行鉴别的方法，其特征在于：所述DNA连接酶为9°N DNA Ligase。

6.如权利要求1所述对中药材麦冬与山麦冬进行鉴别的方法，其特征在于：所述MLPA探针中，麦冬左探针、山麦冬左探针、共同右探针的体积比为0.6：1.0：1.6。

7.如权利要求1所述对中药材麦冬与山麦冬进行鉴别的方法，其特征在于：所述杂交的温度是72℃。

8.如权利要求1所述对中药材麦冬与山麦冬进行鉴别的方法，其特征在于：所述qPCR扩增的循环次数是28次。

9.如权利要求1所述对中药材麦冬与山麦冬进行鉴别的方法，其特征在于：步骤6)中，通过观测样品熔解曲线峰和Tm值进行鉴定，若样品出现单一熔解曲线峰并且Tm值为78.98℃±0.1℃，则为麦冬；若样品出现单一熔解曲线峰且Tm值为80.57℃±0.1℃，则为山麦冬；若样品出现双熔解曲线峰并且熔解峰Tm值为78.98℃±0.1℃和80.57℃±0.1℃，则为麦冬与山麦冬混合样品。