[发明专利]一种补中益气口服液的HPLC特征图谱的建立方法

说明书

本发明公开了一种补中益气口服液HPLC特征图谱建立的方法，属于中药制剂分析领域。此方法优化了特征图谱检测条件，基于化学模式识别技术筛选标志性特征峰，经过方法学考察，最终确定HPLC特征图谱分析方法。采用Kromasil 100‑5‑Csubgt;18/subgt;色谱柱(4.6×250mm，5μm)；以乙腈(A)‑0.2%甲酸水溶液(B)作为流动相；梯度洗脱，流速0.80mL/min；检测波长260nm，进行高效液相色谱分析，得到补中益气口服液特征图谱。该方法具有重复性好、稳定性和精密度高，操作简便等优点，本发明所测得的补中益气口服液特征图谱，充分展示了口服液的化学成分特征，为补中益气口服液后续质量评价研究提供参考。

（一）技术领域

本发明属于中药制剂分析领域，具体涉及补中益气口服液特征图谱的建立方法。

（二）背景技术

补中益气口服液是由炙黄芪、党参、炒白术、炙甘草、当归、陈皮、升麻、柴胡、生姜、大枣十味药材所制得的中药复方制剂，其原方由金元时期著名医家李东垣创立，首载于《内外伤辨惑论》，具有补中益气，升阳举陷的功效。方中黄芪可用于脾胃虚弱、肺气受邪的患者，能够避免自汗而损伤元气；甘草味甘，能泻心火除脾脏热气，中和脾胃元气，炮制品的作用更强；白术可泄胃中热；升麻、柴胡可引补气药的甘温之气上升；陈皮理气，助阳气上升以散滞气。研究表明补中益气口服液具有调节胃肠、增强免疫、抗炎、抗疲劳等药理作用；对于消化系统、呼吸系统、泌尿系统、妇科等方面疾病均有一定疗效。

中药及复方特征图谱是控制药材及复方制剂质量的重要手段,同时也是保证临床疗效的关键。特征图谱具有整体性和模糊性的特点,很好地契合了中药组分的复杂性和多样性的特点,能够评价和控制中药材及复方的质量。补中益气组方拥有多种剂型，如补中益气合剂、丸、颗粒、口服液等，其中合剂、丸、颗粒均收录于2020版中国药典中，而补中益气口服液尚未有明确质量标准。针对上述情况，本发明对补中益气口服液采用HPLC法进行特征图谱研究，严格把控补中益气口服液的质量，全面且直观地反映其内部活性成分的种类和数量，为后续补中益气口服液质量评价体系的建立提供参考。

（三）发明内容

本发明目的在于解决现有技术的不足，提供一种补中益气口服液的特征图谱检测方法，为控制该制剂质量提供了新的技术方法，旨在解决目前对枇补中益气口服液的质量控制技术不足的问题。

为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：一种基于特征图谱的补中益气口服液的评价方法，具体包括如下步骤：

（1）供试品与混合对照品溶液的制备

精密量取补中益气口服液1mL于容量瓶中，用甲醇定容至5mL，超声3min，过0.22μm微孔滤膜，即得供试品溶液。取毛蕊异黄酮-7-O-葡萄糖苷、甘草苷、阿魏酸、橙皮苷、甘草酸铵对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL分别含20μg、50μg、5μg、170μg、10μg、200μg的混合对照品溶液。

（2）特征图谱的优化

对特征图谱构建中的色谱条件（流动相水相酸、波长、柱温、流速、色谱柱）进行优化，建立补中益气口服液最佳高效液相色谱条件。

（3）特征峰的选择

区别于普通特征峰根据色谱峰高低进行选择，本发明中利用化学模式识别技术（CA、PCA、PLS-DA），对不同批次补中益气口服液的色谱峰进行分析，筛选出对于样品质量影响较大色谱峰。以此筛选结果为参考，确定色谱图特征峰。

（4）特征图谱的方法学考察

对特征图谱的建立方法进行精密度、重复性、稳定性考察，佐证该分析方法可适用于补中益气口服液特征图谱分析。

（5）建立补中益气口服液的特征图谱