[发明专利]猪RIG-I样受体RIG-I特异性单克隆抗体和应用

说明书

本发明公开了猪RIG‑I样受体RIG‑I特异性单克隆抗体，该抗体为猪RIG‑I蛋白特异性单克隆抗体，所述猪RIG‑I蛋白特异性单克隆抗体由杂交瘤细胞株pRIG‑I mAb产生，所述杂交瘤细胞株pRIG‑I mAb的保藏编号为CCTCC NO:C2022133。

技术领域

本发明属于医学和生物学技术领域，具体涉及猪RIG-I样受体特异性单克隆抗体及其制备方法和应用。

背景技术

据了解，单克隆抗体技术是现代生命科学研究的重要技术，其在蛋白质的结构与功能研究方面、在人类和动植物的免疫学诊断方面都发挥着无可代替的重要作用。单克隆抗体在疾病预防、临床治疗、疾病诊断及检测中均有众多应用，同时单克隆抗体在生物学研究领域作为研究工具也得到广泛使用。天然免疫是机体防御感染的第一道防线，天然免疫通过一系列模式识别受体(PRR)家族识别来自病原体的各种保守分子从而启动细胞信号和免疫应答。天然免疫RIG-I样受体(RLR)家族是胞浆内的双链RNA(dsRNA)识别受体，在识别和防御病毒尤其是RNA病毒感染中发挥关键作用。RLR家族包括RIG-I、MDA5和LGP2三个成员。

RIG-I是最早发现的RLR原型受体，包括N端的两个半胱天冬酶活化募集结构域(CARDs)；中间的RNA解旋酶结构域，能够和C端结构域一起结合RNA；C端的编码自身活化抑制域(RD)或被称为调节结构域(RD)，负责识别并结合病毒RNA。没有病毒感染时，RIG-I呈静息状态，活性区CARDs与CTD和RNA解旋酶结构域结合，后者阻止CARDs与修饰蛋白接触活化。RIG-I能够识别5'-三磷酸dsRNA(5'-ppp-dsRNA)和短链dsRNA(＜300bp)。RIG-I在抗病毒免疫中发挥重要作用，这些病毒包括大多数单负链RNA病毒，如副粘病毒家族的新城疫病毒(Newcastle disease virus，NDV)、正粘病毒科的流感病毒、弹状病毒科的水疱性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus，VSV)和狂犬病病毒(Rabies virus，RV)，单正链RNA病毒如日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus，JEV)，以及一些DNA病毒如腺病毒和痘苗病毒等。

MDA5与RIG-I具有相似的分子结构，包括N端的两个半胱天冬酶活化募集结构域(CARDs)；中间的RNA解旋酶结构域，能够和C端结构域一起结合RNA；C端的编码自身活化抑制域(RD)或被称为调节结构域(RD)，负责识别并结合病毒RNA。没有病毒感染时，MDA5呈静息状态，活性区CARDs与CTD和RNA解旋酶结构域结合，后者阻止CARDs发生活化。MDA5优先识别长的双链RNA(dsRNA)(＞1000bp)。MDA5同样在抗病毒免疫中发挥重要作用，这些病毒主要为小核糖核酸病毒科的病毒如脑心肌炎病毒(EMCV)，还有呼肠孤病毒科病毒如轮状病毒(Rotavirus)等。

LGP2缺少N端的信号活性区域(CARDs)，但其能够与配体dsRNA高亲和力结合，发挥重要的调控功能。在RIG-I和MDA5信号介导的抗病毒免疫中，LGP2发挥的确切调控功能和作用机制尚未明晰，另外LGP2在细胞免疫应答中的作用及机制研究更需要进一步深入。

猪是非常重要的经济动物，但由于缺乏商业化的猪RLR蛋白RIG-I、MDA5和LGP2抗体工具，也没有猪RLR单克隆抗体的文献报道(现有RLR蛋白抗体都是人和鼠RLR的抗体，与猪RLR蛋白的交叉反应性没有测试数据，并不能与猪RLR蛋白进行反应)，猪RLR蛋白功能相关研究非常缺乏。此外，猪还是包括传染病在内的多种人类疾病非常有前途的动物模型，因此研制出能区分猪和人RLR的特异抗体来研究其种属差异显得非常必要。

发明内容

本发明针对所要解决的技术问题，克服现有技术的不足而提供一种猪RIG-I样受体特异性单克隆抗体及其制备方法和应用。