[发明专利]尿液中儿茶酚胺代谢产物浓度的检测方法

说明书

本发明提供了一种尿液中儿茶酚胺代谢产物浓度的检测方法，涉及儿茶酚胺代谢产物检测技术领域。该检测方法用于检测尿液中儿茶酚胺代谢产物变肾上腺素(MN)、去甲变肾上腺素(NMN)和3‑甲氧基酪胺(3‑MT)，检测方法包括先对样品固相萃取，复溶后进行高效液相色谱结合荧光检测分析；高效液相色谱结合荧光检测分析中采用的内标为香兰素胺盐酸盐。该检测方法具有稳定性好，特异性强和灵敏度高的优点。

技术领域

本发明涉及儿茶酚胺代谢产物检测技术领域，尤其是涉及一种尿液中儿茶酚胺代谢产物浓度的检测方法。

背景技术

嗜铬细胞瘤和副神经节瘤(pheochromocytoma and paraganglioma，PPGL)是分别起源于肾上腺髓质或肾上腺外交感神经链的肿瘤，主要合成和分泌大量儿茶酚胺，引起患者血压升高等一系列临床症候群，并造成心、脑、肾等严重并发症。激素及代谢产物的测定是PPGL定性诊断的主要方法，包括测定血和尿去甲肾上腺素(Norepinephrine，NE)、肾上腺素(Epinephrine，E)、多巴胺(Dopamine，DA)及其中间代谢产物变肾上腺素(MN)、去甲变肾上腺素(NMN)、3-甲氧基酪胺(3-MT)和终末代谢产物香草扁桃酸(VMA)及高香草酸(HVA)浓度。MN、NMN及3-MT分别是E、NE及DA的中间代谢产物，它们仅在肾上腺髓质和PPGL瘤体内代谢生成并且以高浓度水平持续存在，故是PPGL的特异性标记物，找到一种能够快速检测这3种代谢产物的方法至关重要。

近几年国内外都有儿茶酚胺类物质的分析方法的相关报道，这些方法包括荧光成像法、电化学法、质谱法、色谱法、光度分析法、非损伤成像技术等，由于许多分析方法在灵敏度、选择性及分析速度等方面达不到样品分析的要求，从而不能在临床上推广应用。所以发展高效样品预处理、高通量、高灵敏的分析方法是未来几年的必然趋势。因此，本发明针对现有儿茶酚胺代谢产物在尿液中的浓度检测存在的问题与不足，研究了一种快速检测尿液中儿茶酚胺代谢产物浓度的检测方法，该方法对于快速高通量的测定尿液中的儿茶酚胺代谢产物浓度具有重要的意义。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明目的在于提供一种尿液中儿茶酚胺代谢产物浓度的检测方法，该方法缓解了现有技术中缺乏一种特异性强，准确度高的儿茶酚胺代谢产物浓度的检测方法的问题。

为解决上述技术问题，本发明特采用如下技术方案：

根据本发明的一个方面，本发明提供了一种尿液中儿茶酚胺代谢产物浓度的检测方法，所述代谢产物为NMN、MN和3-MT；

所述检测方法包括先对样品固相萃取，复溶后进行高效液相色谱结合荧光检测分析；高效液相色谱结合荧光检测分析中采用的内标为香兰素胺盐酸盐。

优选地，所述固相萃取包括：向活化过的SPE柱中加入预混有内标的样品，施加正压或负压抽滤后依次经淋洗液淋洗和洗脱液洗脱，然后氮吹复溶；

所述淋洗液为10～60mmol乙酸铵水溶液，所述洗脱液按照体积百分比计，含有90～98％的乙腈，1～5％的水和1～5％的甲酸；

优选地，所述淋洗液为20mmol乙酸铵水溶液；

优选地，所述洗脱液中乙腈、甲酸和水的体积比为98:2:2。

优选地，高效液相色谱的流动相A为含有KH₂PO₄和EDTA-2Na的水溶液，其中KH₂PO₄的浓度为10～30mmol，EDTA-2Na的浓度为0.1～0.5mmoL；流动相B为甲醇；

优选地，所述流动相A中KH₂PO₄的浓度为20mmoL，EDTA-2Na的浓度为0.2mmoL。

优选地，洗脱程序为：