[发明专利]检测猴痘病毒并分型的组合物、试剂盒、方法及其用途

说明书

本发明属于分子生物学检测领域，具体地，涉及检测猴痘病毒并分型的组合物、试剂盒、方法及其用途。本发明提供一种检测猴痘病毒并分型的组合物，与此同时，还提供了包括所述组合物的试剂盒，所述组合物的用途，以及用于检测猴痘病毒并分型的方法。使用本发明的组合物，能够以200拷贝/mL的灵敏度对猴痘病毒进行快速检测。同时在反应体系中实现猴痘病毒的检测和分型。使得不同猴痘分支能够得到区分，可以更有针对性的进行治疗和预防。

技术领域

本发明属于分子生物学检测领域，具体地，涉及检测猴痘病毒并分型的组合物、试剂盒、方法及其用途。

背景技术

猴痘(monkeypox)亦称猴天花，并已被定为人畜共患病。以猴痘病毒为病原，发源于中、西非的热带雨林地区。猴痘病毒是一种基因组长达200Kb左右的DNA病毒，属于痘病毒科正痘病毒属，外形为回角砖形或卵圆形，大小为200-400nm，外被脂蛋白膜或封套，中间具有两个含蛋白质的侧体，有1个厚膜核心，核心内含很大的双链DNA基因组。猴痘病毒的基因组为双链DNA，长约197kb，基因组末端包含一个相同但方向相反的末端反向重复序列。该病毒包含190个开放阅读框，其中4个位于末端反向重复序列中；同一属的病毒还包括天花病毒、牛痘病毒等。猴痘是一种罕见的病毒性人畜共患病（从动物传播给人的病毒），病人症状与过去在天花病人身上所观察到的相似，但临床严重程度较轻。随着在1980年消灭了天花和随后停止接种天花疫苗，猴痘成为最严重的正痘病毒。

猴痘病毒（MPV）主要有两个分支：西非分支（West African Clade）和刚果金（中非）分支（Congo Basin clade）。西非分支的致死率较低，死亡率达3.6%；相比之下，刚果金分支感染会出现大约两周的无症状潜伏期，死亡风险高达10.6%。可见，两种支系的致死性有明显差异。由于西非分支和刚果金分支这两种进化支病毒引起疾病的流行病学和临床特征均不相同，加强不同进化支病毒遗传学差异的特征研究，对西非支系和刚果金支系进行精准分型，对疾病的防控是十分必要的。

而猴痘只能由实验室确诊。国际上尚无一种通用的、安全快速的对天花和猴痘病毒感染的血清学诊断方法，而生物学鉴别诊断（病毒分离培养、电镜观察等）通常需3-6天，且存在生物安全危害隐患。由于血清学诊断与临床诊断的灵敏度不高，不易鉴别诊断天花、猴痘及其他出皮疹的疾病，所以采用分子诊断（PCR或荧光定量PCR）技术来进行病毒感染的快速特异诊断方法快速发展。而现有的分子诊断大多存在灵敏度不高等缺陷。

因此，本领域需求一种灵敏度高的快速诊断猴痘病毒并对西非支系和刚果金支系进行分型的产品，以便应对突发的猴痘疫情。

发明内容

有鉴于此，第一方面，本发明提供一种检测猴痘病毒的组合物，所述组合物包括：

猴痘病毒通用上游引物（MPV-F）：5'-AGAGATTGGTCTTTTCGTAT-'3（SEQ ID NO:1）；

猴痘病毒通用下游引物（MPV-R）：5'-ATTTAGCTGCATTATTTTTAG-'3（SEQ ID NO:2）；以及

猴痘病毒通用探针（MPV-P）：5'-TCCGTCAATGTCTACACAGGCATAAAA-'3（SEQ ID NO:3）。

使用本发明的组合物，能够以200拷贝/mL的灵敏度对猴痘病毒进行快速检测。同时，成本低、时间少，能够应对突发的猴痘疫情。

在一些具体的实施方案中，本发明组合物进一步包括：

猴痘病毒西非分支上游引物（MPVWA-F）：5'-CTCACACCGTCTCTTCCACAGA-'3（SEQ IDNO:4）；

猴痘病毒西非分支下游引物（MPVWA-R）：5'-TGGATACAGGTTAATTTCCACATCG-'3（SEQID NO:5）；以及