[发明专利]一种用于基因多态性分型的鉴定方法及其应用

权利要求书

1.一种用于基因多态性分型的鉴定方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、根据待检测样品中不同多态性位点的基因序列，分别设计两条对应所述不同多态性位点的特异性引物ASP1和ASP2，以及一条通用反向引物LSP；

S2、分别在所述特异性引物ASP1和ASP2中嵌入一段额外序列，并且所述特异性引物ASP1和ASP2的3＇末端碱基分别和待检测样品中的不同多态性位点匹配；

S3、配制PCR反应体系，加入相应试剂后，进行AS-PCR扩增反应；

S4、扩增反应完成后，通过熔解曲线分析，即可完成对待检测样品基因分型鉴定。

2.根据权利要求1所述的用于基因多态性分型的鉴定方法，其特征在于，步骤S1中，所述特异性引物ASP1和ASP2位于所述多态性位点的上游或位于所述多态性位点的下游。

3.根据权利要求1所述的用于基因多态性分型的鉴定方法，其特征在于，步骤S2中，所述额外序列插入的位置距离所述特异性引物的3＇末端最短距离为10个碱基，最远可位于所述特异性引物的5＇末端。

4.根据权利要求1所述的用于基因多态性分型的鉴定方法，其特征在于，步骤S2中，所述额外序列选自GC-add或AT-add中的一种。

5.根据权利要求4所述的用于基因多态性分型的鉴定方法，其特征在于，所述GC-add添加在所述特异性引物ASP1中，所述AT-add添加在所述特异性引物ASP2中。

6.根据权利要求5所述的用于基因多态性分型的鉴定方法，其特征在于，所述GC-add和所述AT-add分别在所述特异性引物ASP1和ASP2上的插入位点和3＇末端碱基的距离相同或不同。

7.根据权利要求4所述的用于基因多态性分型的鉴定方法，其特征在于，所述GC-add和所述AT-add的长度相同或不同。

8.根据权利要求4所述的用于基因多态性分型的鉴定方法，其特征在于，所述GC-add和所述AT-add至少由如下物质中的一种组成：

1)核苷酸碱基；

2)核苷酸碱基类似物；

3)化学修饰的核苷酸碱基。

9.根据权利要求4所述的用于基因多态性分型的鉴定方法，其特征在于，所述GC-add的长度为3～40bp，并且所述GC-add中的鸟嘌呤碱基(G)和胞嘧啶碱基(C)所占比例不少于60％。

10.根据权利要求4所述的用于基因多态性分型的鉴定方法，其特征在于，所述AT-add的长度为3～40bp，并且所述AT-add中的腺嘌呤碱基(A)和胸腺嘧啶碱基(T)所占比例不少于60％。

11.根据权利要求1所述的用于基因多态性分型的鉴定方法，其特征在于，步骤S3中，所述PCR反应体系包括两条对应所述不同多态性位点的特异性引物ASP1和ASP2、一条通用反向引物LSP、缓冲体系、DNA聚合酶、dNTPs、待检测样品DNA以及荧光染料。

12.根据权利要求11所述的用于基因多态性分型的鉴定方法，其特征在于，所述荧光染料包括可以和双链DNA特异结合或嵌入结合并产生荧光信号的荧光染料。

13.根据权利要求11所述的用于基因多态性分型的鉴定方法，其特征在于，所述待检测样品DNA包括双链DNA、单链DNA、线性DNA、环状DNA以及由RNA转录获得的cDNA。

14.根据权利要求1所述的用于基因多态性分型的鉴定方法，其特征在于，步骤S4中，所述熔解曲线分析过程中，用于双链DNA解链的升温过程中升温速率不低于1.5℃/分钟。