[发明专利]一种窖泥合成微生物组及其制备与应用

权利要求书

1.一种窖泥合成微生物组，其特征在于：所述微生物组包括以下微生物：

瘤胃梭菌（Clostridium rumenum），保藏号为CGMCC No.9926；

己酸杆菌（Caproic acid bacilli），保藏号为GDMCC No.60133；

毛螺旋菌（Trichospirillum），保藏号为CGMCC No.9927；

楔形梭菌（Clostridium sphenoides），保藏号为DSM No.632；

甲烷八叠球菌（sarcina methanica），保藏号为DSM No.800；

甲酸甲烷杆菌（Methanobacterium formicicum），保藏号为DSM No.1535。

2.根据权利要求1所述的窖泥合成微生物组，其特征在于：所述微生物组的细菌浓度为10⁷～10⁹ CFU/mL。

3.根据权利要求1所述的窖泥合成微生物组，其特征在于：所述微生物的相对丰度为：瘤胃梭菌：30～50%；己酸杆菌：15～20%；毛螺旋菌：20～25%；楔形梭菌：10～15%；甲烷八叠球菌：5～10%和甲酸甲烷杆菌：3～5%。

4.如权利要求1～3任意一项所述的一种窖泥合成微生物组的制备方法，其特征在于：包括下述步骤：

S1：将瘤胃梭菌、己酸杆菌、毛螺旋菌、楔形梭菌接种到YRCM培养基中，30～35℃厌氧3～5天后，按等比例混合得到的产酸复合菌液；

S2：将产酸复合菌液连续传代10次，即获得稳定的产酸复合菌液，其中，瘤胃梭菌（CGMCC No.9926），己酸杆菌（GDMCC No.60133），乳酸利用梭菌（CGMCC No.9927）、楔形梭菌（DSM No.632）的丰度分别为40～50%，20～25%，25～30%，15～20%；

S3：将甲烷八叠球菌接种至Medium120，接种量10～20%，培养温度35℃，培养时间3～5天，OD600达到0.8～1.2；

S4：将甲酸甲烷杆菌接处至Medium119，接种量10～20%，培养温度35℃，培养时间5～7天，OD600达到0.5～0.7；

S5：按甲烷八叠球菌：甲酸甲烷杆菌=1:2～3比例混合，得到甲烷菌复合菌液；

S6：将产酸复合菌液：甲烷菌复合菌液=2～3:1比例混合即为窖泥合成微生物组。

5.根据权利要求4所述的窖泥合成微生物组的制备方法，其特征在于：步骤S1中，YRCM培养基（1000mL）的配方为：蛋白胨 5～10g,葡萄糖5～10g, 酵母浸粉3～5g，乙酸钠3～5g，NaCl 2～3g，磷酸氢二钾0.3～0.5g，磷酸二氢钾0.2～0.3g，氯化铵0.2～0.5g，硫酸镁 0.2～0.5g, L-半胱氨酸0.5～0.7g, 黄水100mL，复合微量元素溶液1mL，刃天青（0.1%w/v）0.5mL，pH值5.5～7.0，灭菌20分钟，放置常温后，添加1mL复合维生素溶液。

6.根据权利要求4所述的窖泥合成微生物组的制备方法，其特征在于：步骤S3中，Medium120为：磷酸氢二钾 0.35 g，磷酸二氢钾 0.23 g，氯化铵 0.50 g，硫酸镁 0.50 g，氯化钙 0.25 g，氯化钠2.25 g，硫酸亚铁溶液 (0.1% w/v溶于0.1 N硫酸 ) 2.00 mL，复合微量元素溶1.00 mL，酵母浸粉 2.00 g，蛋白胨2.00 g，乙酸钠 2.50 g，刃天青 (0.1% w/v) 0.50 mL，碳酸氢钠 2.00 g，复合维生素溶液 1.0 mL，甲醇 10.00 mL，L-半胱氨酸0.30 g，硫化钠 0.30 g。