[发明专利]核酸扩增

权利要求书

1.一种拷贝多核苷酸模板的方法，该方法包括：

在包含第一引物和第二引物的反应混合物中温育该多核苷酸模板，其中：

第一引物包含第一区域和第二区域，其中第一引物的第二区域包含与该多核苷酸模板的第一部分互补的核苷酸序列；

第二引物包含第一区域和第二区域，其中第二引物的第二区域包含与配偶体核苷酸序列互补的核苷酸序列，其中该配偶体核苷酸序列与该多核苷酸模板的第二部分互补；并且

在该多核苷酸模板与第一引物和第二引物一起温育时，形成至少一条多联体链，其中该多联体链包含5’端和3’端，并且包含具有5’至3’方向的通用结构C’-T-C’-T-X-C’的核苷酸序列，其中：C’表示第二引物的第一区域的核苷酸序列，T表示该多核苷酸模板的核苷酸序列或其类似序列，且X表示任何数目和序列的核苷酸。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述多联体链是第一多联体链，并且其中在所述多核苷酸模板与第一引物和第二引物一起温育时，还形成了第二多联体链，其中第二多联体链包含5’端和3’端，并且包含具有5’至3’方向的通用结构C-X’-T’-C-T’-C的核苷酸序列，其中：C表示第一引物的第一区域的核苷酸序列，T’表示与多核苷酸模板互补的核苷酸序列，且X’表示与X的核苷酸序列互补的核苷酸序列。

3.如权利要求1所述的方法，其中X含有具有5’至3’方向的通用结构[(C’-T)_N]的序列，其中C’表示第二引物的第一区域的核苷酸序列，T表示多核苷酸模板的核苷酸序列或其类似序列，且N为0至1000之间的任何整数。

4.如权利要求1所述的方法，其中X表示0个核苷酸。

5.如权利要求1所述的方法，其中所述反应混合物进一步包含具有链置换活性的DNA聚合酶。

6.如权利要求5所述的方法，其中所述反应混合物进一步包含逆转录酶。

7.如权利要求1所述的方法，其中所述多核苷酸模板是RNA分子。

8.如权利要求7所述的方法，其中T表示与所述多核苷酸模板的RNA序列类似的DNA序列的核苷酸序列。

9.如权利要求1所述的方法，其中所述多核苷酸模板包含双链核酸模板的一条链。

10.如权利要求1所述的方法，其中在所述反应混合物的温育过程中，反应混合物的温度不超过80℃。

11.如权利要求1所述的方法，其中所述第一引物的第一区域含有4至25个核苷酸。

12.如权利要求1所述的方法，其中所述第一引物的第一区域和所述第二引物的第一区域含有相同数目的核苷酸。

13.如权利要求1所述的方法，其中所述多核苷酸模板含有10至1000个核苷酸。

14.如权利要求1所述的方法，其中所述反应混合物进一步包含核酸染料。

15.如权利要求1所述的方法，其中在该方法开始后60分钟内，所述反应混合物中的多核苷酸模板的拷贝数增加至少10倍。