[发明专利]特异性针对SARS-CoV-2 RBD的纳米抗体

说明书

本发明提供了一种特异性针对SARS‑CoV‑2RBD的纳米抗体，涉及抗体技术领域。本发明提供的特异性针对SARS‑CoV‑2RBD的纳米抗体为SEQ ID NO.1～4所示的任一种。通过对构建的抗体库进行筛选，得到本发明的纳米抗体，该纳米抗体与SARS‑CoV‑2RBD具有良好的亲和力，将其应用于RBD纯化，体现出高特异性，纯化蛋白的纯度高，实现“一步”分离纯化。

技术领域

本发明涉及抗体技术领域，尤其是涉及一种特异性针对SARS-CoV-2 RBD 的纳米抗体。

背景技术

2019年，由新型冠状病毒(SARS-CoV-2)导致的肺炎在世界各地蔓延，已对公众生命安全造成严重威胁。目前，已有四种类型的疫苗获准紧急使用，包括病毒灭活疫苗，重组腺病毒载体疫苗，DNA/mRNA疫苗及重组亚单位蛋白疫苗。其中，重组亚单位疫苗因易于规模化生产和运输，且安全性高的优点，可用于预防和控制疫情蔓延。位于SARS-CoV-2的S蛋白上的受体结合域(RBD) 含有大部分的抗体中和表位，因此SARS-CoV-2病毒的亚单位蛋白疫苗主要使用含有RBD区域的重组蛋白作为免疫原，通过激发机体对RBD结构域的免疫反应，阻止病毒与宿主的ACE2受体结合。

全球已有多种重组蛋白药物进入临床研究和上市生产，但是重组蛋白的分离纯化一直是药物工艺开发和成本控制中的关键环节。1968年，Cuatrecasas教授提出亲和层析概念以来，亲和色谱法已发展成为生物医学研究和生物技术中的强大工具。目前许多的重组蛋白药物使用抗体Fc片段作为标签，可以利用 Protein A或Protein G层析柱进行纯化。但对于一些不使用Fc标签的重组蛋白，如果使用6×His作为标签，通过金属离子亲和层析柱纯化后，蛋白中会残留金属离子。因此，设计和筛选低成本，高稳定性，与目标蛋白高特异性结合的特定配体来制备亲和层析柱，是药物生产的关键步骤。

纳米抗体是骆驼科动物体内重链抗体(IgG2和IgG3)中与抗原结合的区域，也被称为VHH片段。由于其分子量小，稳定性高，易于在细菌表达系统中大量生产，可以作为亲和配体的重要来源。目前，多个团队利用抗Fc的VHH抗体制备亲和树脂，用于纯化免疫球蛋白G(IgG)，其纯化效率优于经典的Protein A 纯化。Timothy Pabst团队使用骆驼VHH抗体作为免疫亲和配体，用于生物活性药物(如重组免疫毒素和凝血因子)的“一步”分离纯化，获得了高纯度和高活性的生物分子。这些应用表明了基于纳米抗体的亲和配体能够简化生物分子的纯化过程，同时保证纯度和活性。

噬菌体展示技术是一种在噬菌体表面展示多种生物大分子，包括蛋白、多肽、抗体、TCR等的分子生物学技术。如果将展示了数十亿生物分子变体的噬菌体文库与靶标相互作用，可以在3～5轮生物淘筛后富集特异性结合靶标的生物分子单克隆。基于不同的淘筛策略，可以选择抗原重组蛋白、细菌、病毒、细胞、小分子等多种靶标对噬菌体文库进行筛选。例如，Rafique A团队从Fab 免疫的羊驼身上筛选到抗Fab片段的VHH，并进行亲和力成熟，最终设计出耐碱性，酸性条件易洗脱，同时对Fabs有很高的亲和力的VHH亲和配体。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的发明人经过长期不懈努力，筛选并获得特异性针对SARS-CoV-2 RBD的抗体。因此本发明提供了如下了技术方案。

第一方面，本发明提供了一种特异性针对SARS-CoV-2 RBD的抗体，其包含表1中所示的SS1中的3个CDR、SS3中的3个CDR、SS4中的3个CDR、或S12中的3个CDR，优选地所述抗体为VHH抗体、重链抗体或纳米抗体，其特征在于，所述VHH抗体、重链抗体或纳米抗体的氨基酸序列包含如SEQ ID NO.1～4所示的任一种。

第二方面，本发明提供了与第一方面所述的抗体相关的生物材料，所述生物材料为如下任一种：

(a)核酸分子，编码权利要求1所述的抗体；

(b)表达盒，含有(a)中核酸分子；