[发明专利]一种新型高稳定性线粒体荧光探针及其制备方法与应用

说明书

本发明公开一种新型高稳定性线粒体荧光探针及其制备方法与应用，制备方法包括：1)将4‑溴‑三苯胺、4‑甲酰苯基硼酸、双三苯基磷二氯化钯、碳酸钾混合于30‑60mL四氢呋喃中，将混合物在50‑65℃搅拌反应20‑25h，分离；2)将4‑甲基吡啶和2‑溴乙醇溶于30‑50mL乙腈中，75‑90℃加热回流18‑30h，减压除溶剂，再经乙醚沉淀；3)将制得的5‑(4‑(二苯基氨基)苯基)噻吩‑2‑甲醛、1‑(2‑羟乙基)‑4‑甲基吡啶‑溴化物和哌啶加入到30‑50mL氯仿中，于50‑65℃加热回流反应10‑15h，经乙醚沉淀得到线粒体荧光探针。本发明能直观、高效地检测线粒体形态及数量的变化。

技术领域

本发明涉及一种新型高稳定性线粒体荧光探针及其制备方法与应用，属于荧光探针技术领域。

背景技术

线粒体存在于大多数真核细胞中，是细胞的“能量工厂”，负责细胞能量的供给和储藏。糖类、脂肪、氨基酸最终在线粒体中被氧化并释放能量。除了能量供给，线粒体还调节细胞代谢与增值并控制细胞程序性死亡，是影响细胞生理活动及病理活动的重要细胞器。因此，线粒体靶向探针的开发具有重要意义。

理想的线粒体靶向探针应该在细胞其他位置不发射荧光，仅在线粒体部位发射荧光，实现线粒体成像。除此之外，线粒体探针还应该具有良好的光稳定性，在被激发光激发后保持高度的稳定性。目前已有商业化的荧光探针，诸如MitoTracker Red FM(MTR)，MitoTracker Green FM(MTG)，TMRM，TMRE和JC-1等，尽管也具有良好的线粒体成像效果，但是在被激发光照射成像时往往耐光漂白性较差，仅照射几分钟探针会发生变形，失去成像能力。因此，需要开发制备程序简单、线粒体成像能力好、光稳定性强的荧光探针，并适用于活细胞内的线粒体靶向成像。

发明内容

针对上述现有技术存在的问题，本发明提供一种新型高稳定性线粒体荧光探针，能够高保真度的成像线粒体。

本发明还提供了所述新型高稳定性线粒体荧光探针的制备方法，具有极简单的合成工艺，极低的成本，极高的产率。

本发明还提供了所述新型高稳定性线粒体荧光探针的应用。

为了实现上述目的，本发明采用的一种新型高稳定性线粒体荧光探针，其结构式为：

另外，本发明还提供了所述的新型高稳定性线粒体荧光探针的制备方法，包括以下步骤：

1)先将4-溴-三苯胺1.5-2g、4-甲酰苯基硼酸1.2-1.8g、双三苯基磷二氯化钯0.1-0.5g、碳酸钾2-5g混合于30-60mL四氢呋喃中，然后将混合物在50-65℃搅拌反应20-25h，分离得到5-(4-(二苯基氨基)苯基)噻吩-2-甲醛；

2)将4-甲基吡啶2-3g和2-溴乙醇3-6g溶于30-50mL乙腈中，75-90℃加热回流18-30h，减压除溶剂，经乙醚沉淀得到1-(2-羟乙基)-4-甲基吡啶-溴化物；

3)将制得的5-(4-(二苯基氨基)苯基)噻吩-2-甲醛1-2g、1-(2-羟乙基)-4-甲基吡啶-溴化物1-2g和哌啶1-3滴加入到30-50mL氯仿中，于50-65℃加热回流反应10-15h，经乙醚沉淀得到所述新型高稳定性线粒体荧光探针。

作为改进，所述步骤1)中4-溴-三苯胺1.8g、4-甲酰苯基硼酸1.5g、双三苯基磷二氯化钯0.33g、碳酸钾3.24g混合于四氢呋喃50mL中。

作为改进，所述步骤1)中采用柱层析分离得到5-(4-(二苯基氨基)苯基)噻吩-2-甲醛。

作为改进，所述步骤2)中4-甲基吡啶2.5g和2-溴乙醇5g溶于40mL乙腈中。